[发明专利]一种眼部干细胞膜片及其制备方法

说明书

本发明提供一种眼部干细胞膜片及其制备方法，包括以下步骤：1)用完全培养基培养和扩增脐带干细胞；2)在培养皿中加入明胶溶液，将呈碗状的硅水凝胶载体扣在培养皿中孵育；3)另取新的培养皿，加入完全培养基，将孵育后的硅水凝胶载体翻面取出，开口朝上垂直放入完全培养基中；4)将培养的脐带干细胞消化，重悬均匀，吸取细胞悬液滴入呈碗状的硅水凝胶载体的凹面处，放入培养箱培养；5)定期清洗和换液，待脐带干细胞铺满后，清洗，将硅水凝胶载体转移到加有完全培养基的膜片取用盒，封上封口膜。本发明的眼部干细胞膜片可以与人眼生理相容，可用于抑制眼部炎症反应，减轻眼部纤维化修复。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别地，涉及一种眼部干细胞膜片及其制备方法。

背景技术

眼睛是心灵的一扇窗户，这扇窗户如今正在被一系列问题困扰。过度用眼、年龄老化和先天性基因突变导致的青光眼、白内障、红眼病、屈光不正和视网膜退行性疾病等眼科疾病正在不断增加。

根据世界卫生组织发布的首份《世界视力报告》，目前全球有超过22亿人视力受损或失明，其中有超过10亿人是因近视、远视、青光眼和白内障等问题未得到必要的治疗所导致。目前针对眼科疾病的治疗方法主要有药物治疗、基因治疗、手术治疗和细胞治疗。其中药物治疗一般只能缓解病程，需要持续用药。基因治疗有一定的局限性，对单基因控制的眼科疾病是比较有效的，但是大多数眼科疾病都是由于先天和后天多种因素造成的。手术治疗可以根除或减轻疾病，但同时有一定的风险性和局限性，很多眼科疾病无法进行手术。细胞治疗是通过干细胞移植或定向分化的感光细胞替代损伤的方式治疗眼科疾病。

在治疗眼科疾病中，干细胞是目前最具有应用前景和临床转化潜能的策略之一。干细胞不仅有很强的自我更新能力也具有很强的调控作用，主要表现为通过影响免疫细胞的增殖、分化和免疫因子的分泌而抑制免疫反应，因此，干细胞会显示出较强的抗炎能力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种眼部干细胞膜片，该膜片负载有脐带干细胞，可以与人眼生理相容，具有良好的透光性和透氧率，脐带干细胞可通过分泌生长因子来抑制眼部疾病的炎症反应，减轻眼部纤维化。

本发明的技术方案如下：

一种眼部干细胞膜片的制备方法，其特征在于,包括以下步骤：

1)用完全培养基培养和扩增脐带干细胞；

2)在培养皿中加入明胶溶液，将呈碗状的硅水凝胶载体扣在培养皿中，放入30～40℃培养箱中孵育0.5～2h；

3)另取新的培养皿，加入带有抗生素的完全培养基，将步骤2)孵育后的硅水凝胶载体翻面取出，开口朝上垂直放入完全培养基中；

4)将步骤1)培养的脐带干细胞消化，重悬均匀，吸取细胞悬液滴入呈碗状的硅水凝胶载体的凹面处，待细胞沉底后放入培养箱培养；

5)定期清洗和换液，待脐带干细胞铺满所述硅水凝胶载体后，清洗，将硅水凝胶载体转移到加有完全培养基的膜片取用盒，封上封口膜。

脐带干细胞(MSC)是多能干细胞，具有高度自我更新能力和多向分化潜能的特征。MSC具有免疫调节特性和低免疫源性，以及较少的副作用。脐带干细胞具有平衡免疫促进和免疫抑制的特性。脐带干细胞可以通过旁分泌机质以及脐带干细胞与免疫细胞的相互作用，介导调节免疫反应平衡，最终促进局部炎症反应下调，减轻眼部各组织炎症损伤，脐带干细胞对炎症免疫反应的调节主要包括对先天免疫和获得性免疫反应的调节；免疫炎症对于组织再生是不利的因素，尽管炎症可能加速修复反应，带来的负面效应却是纤维化形成，阻碍再生。因此，减轻损伤眼部的炎症反应程度，可以减轻纤维化修复，有利于组织再生修复发展。