[发明专利]用于构建MC4R基因突变的肥胖症猪核移植供体细胞的CRISPR系统及其应用有效
| 申请号： | 202011504254.9 | 申请日： | 2020-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN112608941B | 公开（公告）日： | 2023-03-21 |
| 发明（设计）人： | 牛冬;汪滔;马翔;刘璐;曾为俊;王磊;程锐;赵泽英;陶裴裴;黄彩云 | 申请（专利权）人： | 南京启真基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;C12N15/113;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 傅婷婷;徐冬涛 |
| 地址： | 211306 江苏省南京市高淳区经*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 构建 mc4r 基因突变 肥胖症 移植 供体 细胞 crispr 系统 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于猪MC4R基因编辑的CRISPR/Cas9系统，其特征在于包含Cas9表达载体和针对猪MC4R基因的gRNA表达载体；所述的Cas9表达载体为质粒全序列如SEQ ID NO.2所示的pU6gRNA-eEF1a-mNLS-hSpCas9-EGFP-PURO载体；所述的针对猪MC4R基因的gRNA表达载体由SEQ ID NO.26和SEQ ID NO.27所示的单链DNA退火而成的双链插入载体骨架pKG-U6gRNA所得；该表达载体表达SEQ ID NO.22所示的gRNA，其靶点如SEQ ID NO.18所示；所述的的载体骨架pKG-U6gRNA的质粒全序列如SEQ ID NO.3所示；所述的gRNA表达载体和Cas9表达载体的摩尔比为3:1。
2.一种敲除猪MC4R基因的猪重组细胞，其特征在于由权利要求1所述的CRISPR/Cas9系统共转染猪原代成纤维细胞经验证后所得。
3.权利要求2所述的重组细胞在构建MC4R基因敲除的克隆猪中的应用。
4.权利要求1所述的CRISPR/Cas9系统在构建猪MC4R基因敲除的猪重组细胞中的应用。
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