[发明专利]一种稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法

说明书

本发明公开了一种稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法，其特征在于，包含：制备平衡盐溶液，以及收集肿瘤组织，收集到的肿瘤组织保存于所述的平衡盐溶液中；所述的平衡盐溶液包含：HBSS、体积分数占10％的DMEM/F12、以及质量分数均为1％的青霉素和链霉素；所述的HBSS的成分及终浓度为：NaCl、140mM；KCl、5mM；CaCl₂、1mM；MgSO₄·7H₂O、0.4mM；MgCl₂·6H₂O、0.5mM；Na₂HPO₄、0.3mM；KH₂PO₄、0.3mM；葡萄糖及NaHCO₃均4mM；10％胎牛血清。本发明的PDX肿瘤模型建模方法稳定高效，成功率高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法。

背景技术

为了满足对改进的肿瘤模型需求，目前已经从使用癌细胞系转向患者来源异种移植体(patient-derived Xenograft,PDX)体内动物模型。PDX模型是强大的临床前肿瘤模型，可保留患者肿瘤的组织病理学、基因组和转录组学以及肿瘤异质性和药物反应等特征。通过将癌症患者的肿瘤样品直接移植到免疫受损的小鼠中来产生源自患者的异种移植物。PDX模型已被广泛应用于多种癌症类型，如肝癌、乳腺癌、肺癌和结肠癌。此外，PDX模型对药物治疗的反应与临床结果显著相关，这使得建立个性化异种移植模型成为可能，有助于做出治疗决策并指导癌症治疗。因此，PDX模型被认为是癌症研究中转化药物开发的最佳临床前模型。第一个肝癌PDX模型于1996年报道，但由于植入率非常低，该领域进展缓慢。在过去的五年中，通过改进的实验方法将植入率提高到接近40％，并且已经产生了许多肝癌PDX模型。尽管PDX模型在肝癌治疗中取得了有用的成果，但仍存在一些问题，例如59％的患者植入失败。

因此，有必要进一步的去优化肝癌PDX动物模型的建立方法，从而有效提高移植的成功率以及缩短建模周期。

发明内容

本发明的目的是提供一种稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法，以提高现有PDX肿瘤模型建模方法的成功率。

为了达到上述目的，本发明提供了一种稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法，其特征在于，包含：制备平衡盐溶液，以及收集肿瘤组织，收集到的肿瘤组织保存于所述的平衡盐溶液中；所述的平衡盐溶液包含：HBSS、体积分数占10％的DMEM/F12、以及质量分数均为1％的青霉素和链霉素；所述的HBSS的成分及终浓度为：NaCl、140mM；KCl、5mM；CaCl₂、1mM；MgSO₄·7H₂O、0.4mM；MgCl₂·6H₂O、0.5mM；Na₂HPO₄、0.3mM；KH₂PO₄、0.3mM；葡萄糖及NaHCO₃均4mM；10％胎牛血清。

优选地，收集到的肿瘤组织立刻处理，或添加冻存保护剂后放置在-70℃冰箱保存，供以后PDX模型建立。

优选地，采用组织植入法进行建模，所述的组织植入法包含以下步骤：将收集到的肿瘤组织在所述的平衡盐溶液中切成3*3mm小块，然后植入小鼠体内。

优选地，通过套管针将肿瘤小块植入到小鼠的中背颈区域，然后皮下滑动套管针，直到所述套管针到达侧腹区域，以扩大穿刺口并尽可能多的植入肿瘤小块，然后荷包缝合或“8”字缝合穿刺点防止肿瘤脱出。

优选地，采用细胞植入法进行建模，所述的细胞植入法包含以下步骤：

S1，样本处理，具体包含：将肿瘤组织消化处理并用筛网过滤后，与氯化铵在37℃下孵育30分钟以裂解红细胞，然后离心收集肿瘤细胞，并用培养基冲洗肿瘤细胞；