[发明专利]一种稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法

权利要求书

1.一种稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法，其特征在于，包含：制备平衡盐溶液，以及收集肿瘤组织，收集到的肿瘤组织保存于所述的平衡盐溶液中；保存于所述平衡盐溶液中的肿瘤组织立刻处理，或放置在-70℃冰箱保存，供以后PDX模型建立；

采用组织植入法或细胞植入法进行建模，植入肿瘤组织或细胞时均采用荷包缝合或“8”字缝合；

其中，所述的平衡盐溶液的成分为：HBSS、体积分数占10％的DMEM/F12、以及质量分数均为1％的青霉素和链霉素；所述的HBSS的成分及终浓度为：NaCl、140mM；KCl、5mM；CaCl₂、1mM；MgSO₄·7H₂O、0.4mM； MgCl₂·6H₂O、0.5mM；Na₂HPO₄、0.3mM；KH₂PO₄、0.3mM；葡萄糖及NaHCO₃均4mM；10％胎牛血清。

2.根据权利要求1所述的稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法，其特征在于，采用组织植入法进行建模，所述的组织植入法包含以下步骤：

将收集到的肿瘤组织在所述的平衡盐溶液中切成3*3mm小块，然后植入小鼠体内。

3.根据权利要求2所述的稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法，其特征在于，通过套管针将肿瘤小块植入到小鼠的中背颈区域，然后皮下滑动套管针，直到所述套管针到达侧腹区域，以扩大穿刺口并尽可能多的植入肿瘤小块，然后荷包缝合或“8”字缝合穿刺点防止肿瘤脱出。

4.根据权利要求1所述的稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法，其特征在于，采用细胞植入法进行建模，所述的细胞植入法包含以下步骤：

S1，样本处理，具体包含：将肿瘤组织消化处理并用筛网过滤后，与氯化铵在37℃下孵育30分钟以裂解红细胞，然后离心收集肿瘤细胞，并用培养基冲洗肿瘤细胞；

S2，肿瘤细胞的体外培养及成瘤，具体包含：将肿瘤细胞在含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养24小时；培养获得的肿瘤细胞注射入小鼠体内，以形成F0代肿瘤。

5.根据权利要求4所述的稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法，其特征在于，步骤S1中，肿瘤组织消化处理的方法包含：

(1)将肿瘤组织剪碎成小块，放入装有胎牛血清的离心管中，所述的离心管置于冰上；

(2)用冷的HBSS冲洗剪碎后的肿瘤组织，并在含有1％青霉素和1％链霉素的DMEM/F12培养基中于37℃孵育30分钟；

(3)将肿瘤组织切成小片，并用胶原酶消化处理。

6.根据权利要求5所述的稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法，其特征在于，所述的胶原酶的浓度为0 .02mg/ml，消化时间为15分钟。

7.根据权利要求4所述的稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法，其特征在于，步骤S2中，肿瘤细胞的注射点荷包缝合或“8”字缝合。

8.根据权利要求4所述的稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法，其特征在于，所述的F0代肿瘤用于直接移植到小鼠体内或分离培养出肿瘤细胞后注射入小鼠体内，以形成下一代肿瘤。

9.根据权利要求1所述的稳定高效的PDX肿瘤模型建模方法，其特征在于，所述的肿瘤为肝癌肿瘤。