[发明专利]一种非人哺乳动物性早熟动物模型的建立方法及其用途

说明书

本发明提供了一种非人哺乳动物性早熟动物模型的建立方法及其用途，具体地，本发明提供了一种非人哺乳动物的性早熟动物模型的制备方法，该方法包括以下步骤：(a)提供非人哺乳动物的细胞，将所述细胞中的MKRN3(环指蛋白3基因，Makorin Ring Finger Protein 3)基因失活，得到MKRN3基因失活的非人哺乳动物细胞；和(b)利用步骤(a)中得到的MKRN3基因失活的细胞，制备得到MKRN3基因失活的性早熟动物模型。本发明的动物模型是一种有效的性早熟动物模型，可用于研究(a)缩短非人哺乳动物的性成熟时间；和/或(b)动物模型产生时间。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种非人哺乳动物性早熟动物模型的建立方法及其用途。

背景技术

猕猴和人类一样是有月经周期的单胎生殖动物，其性成熟时间在4年以上，怀孕期和哺乳期也都在半年以上，如此长的繁育周期极大地限制了基因编辑猴模型构建及相关研究工作的进度。而啮齿类动物青春期很短，在啮齿类水平上开展性早熟研究不足以揭示人类性早熟的相关机制，因此在该领域研究中猕猴具有不可替代性。

然而目前的猕猴方面的性早熟动物模型还没有相关报道。

因此，本领域迫切需要开发一种能够诱导性早熟的动物实验模型。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够诱导性早熟的动物实验模型。

本发明第一方面提供了一种非人哺乳动物的性早熟动物模型的制备方法，包括以下步骤：

(a)提供非人哺乳动物的细胞，将所述细胞中的MKRN3(环指蛋白3基因，MakorinRing Finger Protein 3)基因失活，得到MKRN3基因失活的非人哺乳动物细胞；和

(b)利用步骤(a)中得到的MKRN3基因失活的细胞，制备得到MKRN3基因失活的性早熟动物模型。

在另一优选例中，所述性早熟包括雄性性早熟。

在另一优选例中，所述性早熟包括儿童中枢性性早熟。

在另一优选例中，所述性早熟包括中枢性性早熟、外周性性早熟、部分性性早熟。

在另一优选例中，在步骤(a)中，还包括如下步骤：

(a1)利用CRISPR基因编辑技术，将所述MKRN3基因进行剔除或中断，得到MKRN3基因失活的非人哺乳动物细胞。

在另一优选例中，利用CRISPR基因编辑技术，将所述MKRN3基因中的第一个外显子进行剔除或中断，得到MKRN3基因失活的非人哺乳动物细胞。

在另一优选例中，利用CRISPR基因编辑技术，将所述MKRN3基因中的编码区进行剔除或基因编辑，从而得到MKRN3基因失活的非人哺乳动物细胞。

在另一优选例中，所述CRISPR基因编辑技术包括CRISPR-Cas9基因编辑技术。

在另一优选例中，所述步骤(a1)中包括将gRNA和cas9 mRNA混合物注射至非人哺乳动物细胞的受精卵中。

在另一优选例中，所述步骤(a1)中包括将携带有gRNA和cas9 mRNA编码序列的载体转染到非人哺乳动物的受精卵中。

在另一优选例中，所述携带有gRNA和cas9 mRNA编码序列的载体是病毒载体。

在另一优选例中，所述gRNA进入到非人哺乳动物受精卵以后，能够靶向MKRN3基因，并在cas9的作用下对MKRN3基因进行编辑，导致MKRN3基因失活。

在另一优选例中，所述gRNA序列选自下组：

(i)SEQ ID NO.1和2所示的序列，或其组合；