[发明专利]一种FAP修饰的类外泌体纳米囊泡肿瘤疫苗

说明书

本发明公开了一种FAP修饰的类外泌体纳米囊泡肿瘤疫苗。疫苗包括纳米囊泡，以及佐剂；纳米囊泡能表达如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2序列所示的FAP基因。本发明以FAP修饰的类外泌体肿瘤纳米囊泡来制备能够用于治疗肿瘤的疫苗，制备得到的疫苗能够通过同时靶向肿瘤细胞和TAFs的杀伤，从而解除免疫抑制屏障，重塑肿瘤微环境来增强抗肿瘤效果。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，具体涉及一种FAP修饰的类外泌体纳米囊泡肿瘤疫苗。

背景技术

肿瘤来源的外泌体作为一种无细胞疫苗已被报道具有抗肿瘤效应，但其产量低，制备方式复杂限制其规模化的生产。研究发现将肿瘤细胞直接挤压形成的纳米囊泡拥有与外泌体一样的生物特性，并成功克服了生产外泌体产量不足的问题。肿瘤间质环境对肿瘤的发生和发展至关重要，肿瘤相关的成纤维细胞(TAFs)是肿瘤间质的主要成分之一。研究报道，TAFs可以塑造防止免疫细胞浸润的物理屏障，分泌免疫抑制性因子，从而募集免疫抑制细胞，支持肿瘤的生长。成纤维细胞激动蛋白(FAP)是一种可以促进TAFs的募集，分化和增殖的丝氨酸蛋白酶，在90％以上人类肿瘤中的TAFs上高表达。免疫疗法针对FAP抗原靶向TAFs的杀伤，展现出良好的抗肿瘤效果。靶向FAP的全细胞疫苗和FAP的DNA疫苗已被报道。FAP修饰的类外泌体肿瘤纳米囊泡疫苗作为一种全新的无细胞疗法还未见报道。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种FAP修饰的类外泌体纳米囊泡肿瘤疫苗，该疫苗通过同时靶向肿瘤细胞和TAFs的杀伤，从而解除免疫抑制屏障，重塑肿瘤微环境来增强抗肿瘤效果。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种FAP修饰的类外泌体纳米囊泡肿瘤疫苗，疫苗包括纳米囊泡，以及佐剂；纳米囊泡能表达如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的FAP基因。

进一步地，纳米囊泡来自肿瘤细胞。

进一步地，FAP基因为失去水解活性的基因。

进一步地，SEQ ID NO.1所示的FAP基因为人源FAP基因；SEQ ID NO.2所示的FAP基因为鼠源FAP基因，两者同源性高达91％，尤其是酶活结构域高达92％。

进一步地，FAP全基因编码的第624位丝氨酸突变为了丙氨酸。

由于在进行克隆时只将FAP基因的跨膜区和胞外区克隆至慢病毒目的载体pLJM1中，本申请只需要FAP基因的跨膜区和胞外区相应的序列，在提供的核苷酸序列和氨基酸序列中，只有跨膜区和胞外区的核苷酸序列和氨基酸序列，缺少胞内区的12个碱基和4个氨基酸，因而，突变氨基酸位点在提供的氨基酸序列中的620位。

进一步地，SEQ ID NO.1所示的FAP基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

进一步地，SEQ ID NO.2所示的FAP基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

一种治疗癌症的药物，包括上述的纳米囊泡，以及其在药学上能够接受的佐剂。

一种制备上述纳米囊泡的方法，包括以下步骤：

(1)利用基因定点突变技术将上述基因中的624位丝氨酸(Ser624)突变为丙氨酸(Ala624)，使其失去水解活性，接着用分子克隆技术将该基因的跨膜区和胞外区(13–2283bp)克隆至慢病毒目的载体pLJM1；