[发明专利]AKT新底物HIP-55的磷酸化抗体产品制备方法与应用

说明书

本发明公开了AKT新底物HIP‑55的磷酸化抗体产品制备方法与应用。本发明提供了一种制备HIP‑55蛋白S269或T291位点磷酸化抗体的方法，包括如下步骤：以抗原合成肽作为免疫原，免疫动物，收集抗血清，纯化后得所述HIP‑55蛋白S269或T291位点磷酸化抗体；所述抗原合成肽为在半抗原合成肽的N端连接一个半胱氨酸后与载体蛋白进行偶联所得；所述半抗原合成肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示，且对应HIP‑55蛋白的S269或T291位点修饰有磷酸基团。本发明HIP‑55磷酸化抗体具有很好的敏感性和特异性，可用于检测HIP‑55与AKT互作，进而用于辅助诊断心肌梗死。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及AKT新底物HIP-55的磷酸化抗体产品制备方法与应用。

背景技术

自首次发现以来，丝氨酸/苏氨酸激酶AKT(又称作蛋白激酶B或PKB)作为一种原癌基因，已经成为医学界主要的关注热点，这是因为它在调控各种不同生理或者病理功能(包括代谢、生长、增殖、存活、转录以及蛋白质合成)方面发挥重要作用。AKT主要通过调控其各种底物发挥重要的生理或者病理功能。如AKT通过直接磷酸化AKT底物p21和p27，进而调控细胞周期进程；AKT通过直接磷酸化促凋亡蛋白Bad或转录因子FoxO，而产生抑制凋亡信号，促进细胞存活；AKT通过激活底物AS160对调节生物体糖代谢发挥重要作用。由于AKT通过调节其不同底物蛋白进而调节各种细胞功能，并在众多生物学进程中都扮演着重要角色，这使得调控AKT和/或其底物蛋白成为人类疾病治疗的重要靶标。

HIP-55(hematopoietic progenitor kinase 1[HPK1]-interacting protein of55kDa；也称为drebrin-like protein DBNL、mAbp1或SH3P7)是一个包含多功能域的蛋白质。其结构主要包含着N端的F-actin蛋白结合结构域和C端SH3结构域。

目前对于HIP-55的蛋白性质了解不多，还没有研究表明HIP-55与AKT之间的关系。更没有HIP-55磷酸化抗体的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供AKT新底物HIP-55的磷酸化抗体产品制备方法与应用。

第一方面，本发明要求保护一种制备HIP-55蛋白S269位点磷酸化抗体的方法。

本发明要求保护的制备HIP-55蛋白S269位点磷酸化抗体的方法，可包括如下步骤：以抗原合成肽A作为免疫原，免疫动物，收集抗血清，纯化后得所述HIP-55蛋白S269位点磷酸化抗体。

所述抗原合成肽A为在半抗原合成肽A的C端连接一个半胱氨酸后与载体蛋白进行偶联所得；所述半抗原合成肽A的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，第6位氨基酸残基S修饰有磷酸基团。

第二方面，本发明要求保护一种制备HIP-55蛋白T291位点磷酸化抗体的方法。

本发明要求保护的制备HIP-55蛋白T291位点磷酸化抗体的方法，可包括如下步骤：以抗原合成肽B作为免疫原，免疫动物，收集抗血清，纯化后得所述HIP-55蛋白T291位点磷酸化抗体。

所述抗原合成肽B为在半抗原合成肽B的N端连接一个半胱氨酸后与载体蛋白进行偶联所得；所述半抗原合成肽B的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，第7位氨基酸残基T修饰有磷酸基团。

在第一方面和第二方面中，所述动物均可为兔子(如日本大耳兔)。所述载体蛋白均可为血蓝蛋白(KLH)。

第三方面，本发明要求保护HIP-55蛋白磷酸化抗体。

本发明要求保护的HIP-55蛋白磷酸化抗体，可为如下任一：

(A1)利用前文第一方面中所述方法制备得到的HIP-55蛋白S269位点磷酸化抗体；