[发明专利]一种检测MCR基因的试剂盒、检测方法及其应用

说明书

本发明公开了一种检测MCR基因的试剂盒、检测方法及其应用。该试剂盒包括如下的5组引物对，SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示的引物对、SEQ ID No:3和SEQ ID No:4所示的引物对、SEQ ID No:5和SEQ ID No:6所示的引物对、SEQ ID No:7和SEQ ID No:8所示的引物对以及SEQ ID No:7和SEQ ID No:9所示的引物对。本发明将mcr‑8与mcr‑10的特异性引物对采用了统一的前引物序列SEQ ID No:7后，不仅通过HRM法完成细小的差异的区分分型，还有效的简化了多重PCR体系，能达到良好的扩增效果；同时对于混合有mcr‑1和mcr‑3的临床样品采用本发明的多重PCR试剂盒也能够快速有效地检测及鉴别。弥补了目前市面上还没有出现实现临床样本中所有MCR基因的有效分型与检测的多重PCR试剂盒的空白，特别是能有效鉴别分型mcr‑8和mcr‑10功能的多重PCR试剂盒的空白。

技术领域

本发明属于医疗卫生以及微生物检测领域，特别涉及了一种检测MCR基因的试剂盒、检测方法及其应用。

背景技术

多黏菌素（polymyxin）是发现于多黏类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa）培养液中的抗菌性多肽，有A、B、C、D、E等五种，其中多黏菌素E（colistin）和多黏菌素B（PMB）是临床中最常用的两种多黏菌素。由于其存在一定的神经毒性，在临床上的使用受到严格限制，但在亚洲、欧洲和北美，多黏菌素广泛应用于禽畜养殖业中。

近几年在临床、养殖厂、动物性食物、甚至健康人群样本中，均发现对多黏菌素耐药的可转移性耐药性MCR（mobile colistin resistance）基因。自mcr-1首次报道以来，已在临床和环境样本中多次发现，全世界范围内共有10类MCR基因（mcr-1、mcr-2、mcr-3、mcr-4、mcr-5、mcr-6、mcr-7、mcr-8、mcr-9、mcr-10）被报道发现，且每个基因可能含有多个基因变异类型，其中mcr-1已发现多达30种基因变异类型。由于多黏菌素在养殖业中的广泛使用，使得多粘菌素耐药基因通过动物性食品到人群的食物链进入到健康人群体中。MCR基因的可转移性、高携带率和大范围分布引起社会极大的关注和不安。多粘菌素耐药的肠杆菌科细菌在医学临床不断出现并流行传播，成为全球卫生工作者的关注热点。

然而目前在临床样本中发现的只有mcr-1、mcr-3、mcr-8和mcr-10单独存在的样本，以及mcr-1和mcr-3同时存在的样本，说明部分MCR基因型尚不具备在人群中传播的能力，而携带了在临床中流行的MCR类型的“超级细菌”严重威胁了多黏菌素作为临床治疗中“最后一道防线”的作用。但是，对于MCR基因临床的检测预警以及具体分型，传统的微生物培养法和药敏试验法因耗时长、繁琐的操作过程、对仪器设备要求高等原因未能在临床上大规模推广使用。因此，寻找一种能有效鉴别携带各种MCR基因的“超级细菌”的方法迫在眉睫，同时临床上对能快速鉴别与监测目前在临床中流行的高危型MCR类型（mcr-1、mcr-3、mcr-8和mcr-10）的检测方法尤为重要。

发明内容

本发明的首要目的在于，提供一种检测可移动多黏菌素耐药性MCR基因的试剂盒。

本发明的另一目的在于提供一种非疾病诊断和治疗用途的检测MCR基因的方法。