[发明专利]一种用于表征肺腺癌气阴两虚证的肠道菌群组合及筛选及模型建立方法

说明书

本发明公开了一种用于表征肺腺癌气阴两虚证的肠道菌群组合及筛选及模型建立方法，肠道菌群组合在属水平上的分布前6位的是拟杆菌属，粪杆菌属，双歧杆菌属，普氏菌属，大肠志贺氏杆菌属和链球菌属，运用16s‑RNA测序方法测序，并通过宏基因组学方法加以验证，本发明对筛选得到的肠道菌群组合进行了组外样本宏基因组学验证，该模型发现组的AUC值为0.801，宏基因验证组的AUC值为0.842，证明所发现的属水平上2个特别显著的普氏菌属和链球菌属以及建立的逻辑斯蒂回归模型的结果稳定可靠，明显优于简单罗列几个肠道菌群的形式，得到了深入研究与临床推广中医证型的核心参数，具有普适性和科学性。

技术领域

本发明属于临床医学、分子医学、检验医学、中医学或中西医结合医学领域，具体的说，是一种用于表征肺腺癌气阴两虚证的肠道菌群组合及筛选及模型建立方法。

背景技术

气阴两虚证是非小细胞肺癌的中医典型证候，也是中医学特有的学术概念。其通过中医师经临床四诊合参后得出主观判断结论，目前主要参考内容有《中药新药临床研究指导原则》、《恶性肿瘤中医诊疗指南》中的相关内容，但缺乏客观标准，影响结果的准确性，临床运用及推广均受到限制。明确中医典型证候的客观物质基础有助于促进中医学标准化、客观化发展，并为提高临床诊疗水平提供研究基础。针对非小细胞肺癌的研究表明，肠道菌群在手术、化疗、靶向等治疗前后表现出了种属与活性的显著差异性，并已有经筛选得到与评价临床疗效较为相关的肠道菌群的报道。中医有“肺与大肠相表里”的经典理论，且中医证型研究中已有某些肠道微生物与特定证型相关的报道，但目前尚不足以表征中医证候的生物学特征；基础研究表明，气阴两虚证的生物学内涵可能涉及炎症、免疫、细胞凋亡等多个内容，且有越来越多的证据表明与肠道菌群密切相关。因此，运用科学方法筛选出具有客观表征肺腺癌气阴两虚证作用的肠道菌群组合是科学可行的，并且有助于中医证型的临床推广运用。目前，已有运用组学技术探索中医证型生物学内涵的研究并发现了一些特异性的标记物，但可以表征肺腺癌气阴两虚证的肠道菌群及其组合尚未见报道。因此，为了进一步探究肠道菌群在肺腺癌气阴两虚证中的分布情况及表征作用，运用16s-RNA(16s-RNAsequencing)技术对肺腺癌气阴两虚证首诊患者的肠道微生物进行测序，进而经生信分析后阐述特定肠道菌群在肺腺癌气阴两虚证形成过程中的作用机制，建立判别模型并通过宏基因组学结果验证后得到稳定结果，这是目前探究中医证型生物学基础的较为创新和重要的技术手段，并能较好地将筛选得到肠道菌群及组合转化为客观量化肺腺癌气阴两虚证的核心参数，有助于开展临床运用及推广。

发明内容

本发明针对目前肺腺癌气阴两虚证缺乏肠道菌群组合表征的现状，作出了改进，提供了一种肠道菌群组合用于表征肺腺癌气阴两虚证及其筛选方法和建立判别模型的方法，通过运用16s RNA(16s-RNA sequencing)技术对肺腺癌气阴两虚证首诊患者的肠道微生物进行测序，发现在属水平上分布最为丰富的前6位肠道菌群依次是拟杆菌属(Bacteroides)，粪杆菌属(Faecalibacterium)，双歧杆菌属 (Bifidobacterium)，普氏菌属(Prevotella_9)和大肠志贺氏杆菌属 (Escherichia-Shigella)和链球菌属(Streptococcus)，进而运用LEfSe(LDA Effect Size) 分析方法在属水平上筛选得到两个特别显著的为普氏菌属(Prevotella_9)和链球菌属(Streptococcus)，并使用普氏菌属(Prevotella_9)和链球菌属(Streptococcus)的相对丰度作为自变量建立用于表征肺腺癌气阴两虚证的逻辑斯蒂(Logistic)回归模型，经带入宏基因组学结果进行验证，确定了属水平上2个特别显著的普氏菌属(Prevotella_9)和链球菌属(Streptococcus)以及逻辑斯蒂(Logistic)回归模型的结果准确性，实现了运用肠道菌群组合来客观量化非小细胞肺癌气阴两虚证这一目标，并为临床推广提供了方法及检验核心参数。这一属水平上肠道菌群组合及其在本领域中的合理变形，均属于本发明技术方案要保护的内容。

本发明是通过以下技术方案来实现的：