[发明专利]柠檬酸合酶活性减弱的修饰多肽及利用其产生L-氨基酸的方法

说明书

本公开涉及柠檬酸合酶活性减弱的修饰多肽及利用其产生L‑氨基酸的方法。本公开涉及柠檬酸合酶活性减弱的修饰多肽和利用该修饰多肽生产天冬氨酸衍生的L‑氨基酸的方法。

本申请是分案申请，原申请的申请日为2019年2月12日，申请号为201980001012.7，发明名称为“柠檬酸合酶活性减弱的修饰多肽及利用其产生L-氨基酸的方法”。

[技术领域]

本公开涉及柠檬酸合酶活性减弱的修饰多肽及利用该修饰多肽生产L-氨基酸的方法。

[背景技术]

棒杆菌(Corynebacterium)属微生物，特别是谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriumglutamicum)，是广泛用于L-氨基酸和其他有用物质的生产的革兰氏阳性微生物。对于L-氨基酸和其他有用物质的生产，正在进行各种研究以开发生产高效的微生物和发酵过程技术。例如，主要使用目标物质特异性方法(例如，增加编码L-赖氨酸生物合成涉及的酶或去除对生物合成不必要基因的基因的表达)(韩国专利号10-0838038)。

同时，在L-氨基酸中，L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-甲硫氨酸、L-异亮氨酸、和L-甘氨酸是天冬氨酸(aspartate)衍生的氨基酸，并且草酰乙酸(即，天冬氨酸的前体)的生物合成水平可影响这些L-氨基酸的生物合成水平。

柠檬酸合酶(CS)是通过催化乙酰辅酶A和微生物糖酵解期间生成的草酰乙酸的缩合而生成柠檬酸的酶，并且其也是用于决定进入TCA途径的碳流(carbon-flow)的重要酶。

此前文献(Ooyen等，Biotechnol.Bioeng.，109(8)：2070-2081，2012)中报道了由于编码柠檬酸合酶的gltA基因的缺失导致L-赖氨酸生产菌株中的表型改变。然而，gltA基因缺失的这些菌株的缺点在于，不仅其生长受到抑制而且其糖消耗速率显著降低，因此导致每单位时间的赖氨酸产量低。因此，仍需要可同时考虑有效增加L-氨基酸生产力和菌株生长两者的研究。

[发明内容]

[技术问题]

本发明人已经确认，当使用其中柠檬酸合酶活性减弱到一定水平的新型修饰多肽时，可在不延迟菌株的生长速率的情况下增加L-氨基酸生产量，从而完成本公开。

[技术方案]

本公开的一个目的是提供具有柠檬酸合酶活性的修饰多肽，其中SEQ ID NO:1的氨基酸序列中的第241位氨基酸(天冬酰胺)被另一种氨基酸取代。

本公开的另一个目的是提供编码该修饰多肽的多核苷酸。

本公开的又另一个目的是提供包含该修饰多肽的生产天冬氨酸衍生的L-氨基酸的棒杆菌属微生物。

本公开的又另一个目的是提供用于生产L-氨基酸的方法，其包括在培养基中培养该棒杆菌属微生物；以及从培养的微生物或培养基中回收L-氨基酸。

[有益效果]

当使用具有减弱的柠檬酸合酶活性的本公开的新型修饰多肽时，可在不延迟生长速率的情况下进一步提高天冬氨酸衍生的L-氨基酸的生产量。

[附图说明]

图1示出了菌株的生长曲线，其中引入了gltA基因的缺失和修饰。

[具体实施方式]

本公开详述如下。同时，本公开中公开的各个描述和实施方式也可应用于其他描述和实施方式。也就是说，本公开中公开的各种要素的所有组合落入本公开的范围内。此外，本公开的范围不受以下具体描述的限制。