[发明专利]一种抗HPV E6的单克隆抗体及其细胞株和应用

说明书

本发明公开了一种抗HPV E6的单克隆抗体及其细胞株和应用，涉及生物检测技术领域。所述抗HPV E6的单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO:C2020149或CCTCC NO:C2020153的杂交瘤细胞株分泌得到，本发明还提供所述单克隆抗体在制备HPV E6蛋白检测试剂盒中的应用。本发明提供的单克隆抗体能够与多种HPV类型的E6蛋白结合，特异度强，可用于人HPV E6蛋白检测，提高宫颈癌筛查的特异度，减少漏诊，避免过度诊疗。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体为一种抗HPV E6的单克隆抗体及其细胞株和应用。

背景技术

宫颈癌是所有癌症中目前唯一明确病因的癌症，其主要原因为高危型HPV的持续感染。据报道，女性罹患宫颈癌呈逐年上升趋势，宫颈癌已经成为威胁女性健康的重要疾患，由此造成的生活质量的降低以及死亡已经引起世界卫生组织的关注。因此，宫颈癌的早期诊断以及预防显得越来越重要。在一些发达国家，宫颈癌的早期筛查已经普及。其原因归功于巴氏涂片的广泛应用，从而极大地推动了宫颈癌筛查项目的进展，然而该项技术本身存在局限性，影响了临床诊断效果，如所取的细胞量不稳定，诊断结果受取材的影响而不能重复等。近年来随着液基细胞学的临床应用使细胞量不足的问题得到了改善，然而其与巴氏涂片一样要依赖细胞病理学医生的主观判断，而细胞病理学医生的诊断水准不尽一致，从而降低了细胞学诊断的敏感性。并且，由于细胞学形态异常改变发生比较晚，不能早期预示病变情况，制约了其早期诊断意义。基于以上种种因素，HPV的检测就成为了宫颈癌早期筛查的切入点，这也被国内外同行所认可。

随着HPV HC2方法的普及，其高的检测敏感性以及检测的稳定性使之成为美国FDA认证的检测的金标准，其对宫颈癌的筛查起到了不可替代的作用。然而，由于HPV存在的普遍性和的终生累计感染风险已经达到了80%， 使得该方法对宫颈病变诊断的特异性降低。有很多报道显示，其检测的特异性较低，容易引起假阳性，其结果往往会给临床医生进一步治疗带来困惑，相当一部分医师会采取过度的治疗方式，这样会给病人的身体和心理带来许多的伤害。特异性不高的根本原因在于感染普遍性，以及感染后有一过性消除的特点，检测阳性结果只能证明曾经有过的感染，目前体内是否已经清除病毒，是否持续感染，这些并不能得到证实。即使病毒依然存在于体内，其是否整合入宿主基因中，是否会导致上皮内病变，是否有活性的复制与转录，都无法从的实验结果中判读出来，因而方法也存在局限性。在这样的前提下，检测是否能够成为一个新的生物标记，其所检测的是否可以反映当前体内病毒的活性情况，从而对临床起到更大指导意义成为一个值得探讨的问题。

环状HPV基因组包括七个早期区和两个晚期区，其中，由E6、E7基因编码的致癌蛋白是导致宫颈上皮癌变的重要因子。在HPV感染的最初阶段，HPV病毒会随着细胞凋亡而被清除，但若HPV病毒持续感染，可能会导致病毒随机将E6E7基因整合入宿主细胞中，进而引起E6/E7癌蛋白的过度表达。

E6癌蛋白通过E6AP复合物与细胞凋亡因子p53结合，使p53降解，导致细胞凋亡程序失控，因此， E6癌蛋白是宫颈上皮癌变的最重要的生物标志物，与晚期肿瘤有密切关系。

2015年CFDA批准的Aptima HPV E6 mRNA检测是E6作为宫颈癌筛查特异性生物标志物应用的重要里程碑。然而，mRNA体内易于降解，其检测需要昂贵的仪器、严格的实验室环境及繁琐的程序，因此基于E6 mRNA检测的测试可能在常规妇科实践中具有有限的临床应用。 而基于E6或E6蛋白检测的试剂将比检测HPV DNA或HPV E6 mRNA具有优势，而目前市面上仅有针对HPV 16，18等几种HPV类型的E6蛋白检测试剂，并不能满足宫颈癌筛查的需求。

因此，有必要研究一种新的HPV E6蛋白检测试剂盒，满足多种HPV类型同时检测的同时，提高宫颈癌筛查的特异度，减少漏诊，避免过度诊疗。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种HPV E6蛋白检测试剂盒，能够同时检测多种HPV类型的E6蛋白检测试剂盒，提高宫颈癌筛查的特异度，减少漏诊，避免过度诊疗。