[发明专利]核苷转移酶的新功能及应用

权利要求书

1.一种末端脱氧核糖核苷转移酶（TDT）在催化3’端经可逆阻断基团修饰的核苷酸聚合反应中的应用，所述可逆阻断基团为O-氨基、O-烯丙基、O-叠氮基、O-磷酸基团中任一种，所述末端脱氧核糖核苷转移酶选自：SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:11中任一序列所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的应用，所述末端脱氧核糖核苷转移酶分别来源于以下生物体：鸭嘴兽、鼠耳蝠、裸鼢鼠、黑猩猩、壁虎、鸸鹋、原鸡、白喉雀、游隼、金雕。

3.根据权利要求1或2所述的应用，包括在所述末端脱氧核糖核苷转移酶的存在下，使起始序列与至少一种核苷酸接触，合成核酸分子。

4.一种不依赖模板链合成核酸分子的方法，其包括以下步骤：

a）提供起始序列；

b）在权利要求1或2的末端脱氧核糖核苷转移酶（TDT）存在下，向所述起始序列中加入3’带可逆阻断基团的核苷酸；

c）从起始序列中去除TDT或去除溶剂；

d）在裂解剂存在下，从3’端带可逆阻断基团的核苷酸切割可逆阻断基团；

e）去除裂解剂；

其中3’端带可逆阻断基团的核苷酸的所述阻断基团为O-氨基、O-烯丙基、O-叠氮基、O-磷酸基团。

5.根据权利要求4所述的方法，其中通过重复步骤b)至e）加入大于1个核苷酸。

6.一种合成核酸分子的试剂盒，包含权利要求1或2所述的末端脱氧核糖核苷转移酶，起始序列，一个或多个3’端带可逆阻断基团的核苷酸，以及裂解剂；所述3’端带可逆阻断基团的核苷酸的所述阻断基团为O-氨基、O-烯丙基、O-叠氮基、O-磷酸基团。