[发明专利]一种低病毒用量的CAR-T制备方法在审
| 申请号： | 202011176230.5 | 申请日： | 2020-10-29 |
| 公开（公告）号： | CN112251466A | 公开（公告）日： | 2021-01-22 |
| 发明（设计）人： | 于峰详;廉云飞 | 申请（专利权）人： | 江苏拓弘生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10 |
| 代理公司： | 常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙) 32231 | 代理人： | 王巍巍 |
| 地址： | 210000 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 用量 car 制备 方法 | ||
1.一种低病毒用量的CAR-T制备方法，其特征在于，是将分选活化得到的CD3+T细胞进行慢病毒转染。
2.根据权利要求1所述的低病毒用量的CAR-T制备方法，其特征在于，所述CD3+T细胞来源于外周血单核细胞。
3.根据权利要求2所述的低病毒用量的CAR-T制备方法，其特征在于，所述外周血单核细胞需进行冻存处理。
4.根据权利要求1所述的低病毒用量的CAR-T制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
Day 1，进行冻存外周血单核细胞的复苏；
Day 2，所述外周血单核细胞复苏一日后，进行CD3+T细胞的分选活化，磁珠与T细胞共孵育进行激活；
Day 3，取沉降的细胞团离心，重悬后通过添加转染剂进行慢病毒转染；Day 4，转染过夜后，离心除去含转染试剂及病毒的培养基，添加新鲜培养基重悬并计数，调整细胞密度调整并继续培养；
Day 5，更换新鲜培养基，维持细胞密度，继续培养2天。
Day 7，各组细胞计数，更换培养基继续培养，取样检测。
5.根据权利要求4所述的低病毒用量的CAR-T制备方法，其特征在于，步骤Day 2中所述磁珠用量为2E+07，细胞密度维持3.1E+06/ml。
6.根据权利要求4所述的低病毒用量的CAR-T制备方法，其特征在于，所述步骤Day 3所述转染剂的为聚合阳离子转染试剂，用量为8ug/ml。
7.根据权利要求6所述的低病毒用量的CAR-T制备方法，其特征在于，所述聚合阳离子转染试剂为Ploybrene转染试剂。
8.根据权利要求6所述的低病毒用量的CAR-T制备方法，其特征在于，所属聚合阳离子转染试剂为HitransG病毒转染试剂。
9.根据权利要求4所述的低病毒用量的CAR-T制备方法，其特征在于，所述步骤Day4和Day5中所述细胞密度为1.0E+06/ml。
10.根据权利要求4-9任意一项权利要求所述的低病毒用量的CAR-T制备方法，其特征在于，所述细胞数均为活细胞数。
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