[发明专利]一种熊蜂生假丝酵母强组成型启动子及其应用

说明书

本发明公开了一种熊蜂生假丝酵母强组成型启动子及其应用。本发明以熊蜂生假丝酵母为研究对象，预测、克隆、筛选、评价强组成型启动子。以增强型绿色荧光蛋白为报告基因，通过上述所选启动子驱动其表达，分析绿色荧光强度差异及转录水平差异，最终获得了一个具有强转录活性的组成型启动子PX。该启动子与已知强组成型PGPD启动子相比，在以葡萄糖或油酸为唯一碳源及不同培养时期均具有最高强度的转录活性。该实验在熊蜂生假丝酵母中首次以增强型绿色荧光蛋白为报告基因，通过转录组水平分析得到一段具有转录活性强的DNA序列，具有良好的应用前景，丰富了合成生物学元件，同时也为该菌种在其基因工程改造及外源基因表达奠定了理论基础。

技术领域

本发明涉及一种熊蜂生假丝酵母强组成型启动子及其应用，属于分析化学技术领域。

背景技术

熊蜂生假丝酵母(Starmerella bombicola)是一种非致病性的单倍体假丝酵母，因其生产的槐糖脂具有良好的降低表面张力、起泡性、提高溶解性等特性而被广泛的应用到农业、医药及食品行业等领域，并且因其良好的环境友好性，在环境保护方面有着十分广泛的应用前景。目前，国内外相关的研究已经基本阐明了熊蜂生假丝酵母生物合成槐糖脂的代谢途径，并且利用代谢工程的方法提高槐糖脂的产量。现有的技术以主要是利用过表达槐糖脂合成的关键基因提高其产量，而启动子在基因表达过程中发挥着十分重要的作用，控制着基因转录水平的高低。

现如今，随着合成生物学的发展，人们也越来越关注启动子等合成生物学元件领域的相关研究，而强启动子在异源基因的高效表达中有着非常关键的作用，并且组成型启动子的调控不受外界条件的影响，能够使所启动基因持续表达，因此更具有良好的应用前景。熊蜂生假丝酵母中，关于启动子的研究较少，因而在很大程度上限制了其启动子应用的前景，需进一步分析及鉴定熊蜂生假丝酵母启动子并获得强组成型启动子，为其在外源基因高效表达、基因工程及合成生物学等领域奠定基础。

发明内容

为解决上述问题，本发明在熊蜂生假丝酵母中，以报告基因对其启动子进行预测并克隆、筛选及应用评价，并获得了一个强组成型启动子。

本发明的第一个目的是提供一种熊蜂生假丝酵母强组成型启动子，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的第二个目的是提供一种包含所述启动子的表达载体。

进一步地，所述的表达载体为适用于熊蜂生假丝酵母组成型表达的载体。

进一步地，所述的表达载体是以整合型质粒pPHP、整合型质粒pSHS或整合型质粒pAHA为出发载体。

进一步地，所述的整合型质粒pPHP的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的第三个目的是提供一种包含所述启动子的熊蜂生假丝酵母。

本发明的第四个目的是提供所述启动子在熊蜂生假丝酵母遗传改造中的应用。

进一步地，所述的应用是采用所述启动子启动组成型基因的表达。

进一步地，所述的应用具体包括如下步骤：

S1、将所述启动子、待表达基因及终止子进行融合PCR得到基因片段；

S2、将S1步骤得到的基因片段连接到整合型质粒上，得到整合型表达载体；

S3、将S2步骤得到的整合型表达载体转入熊蜂生假丝酵母宿主菌中，得到待表达基因增强表达的熊蜂生假丝酵母重组菌。

进一步地，所述的终止子的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本发明的有益效果：