[发明专利]MIT和/或DIT作为甲状腺癌标志物的应用及试剂盒

说明书

本发明公开了MIT和/或DIT作为甲状腺癌标志物的应用及试剂盒。MIT和DIT为甲状腺激素T4的合成前体物质，在甲状腺组织中表达稳定、恒定存在，具有高度特异性和有效性。本申请首次发现，MIT和DIT的表达量在甲状腺癌症组织和甲状腺正常组织中呈现极显著的差异，MIT和DIT在甲状腺癌症组织中的表达量低于正常组织中表达量的100‑200倍。基于此，MIT和DIT可作为甲状腺癌检测的生物标志物，相应的分析方法均可用于制备甲状腺癌检测试剂盒，为甲状腺癌检测、诊断、治疗以及预后评估提供一种新的技术手段。本发明可实现对穿刺针采取的甲状腺癌的样本进行精准分析，并实现本试剂盒的超高效、高灵敏检测目的。

技术领域

本发明涉及生物分析技术及医学领域，具体涉及一种特异性针对甲状腺癌的生物标志物、应用和癌检测试剂盒。

背景技术

甲状腺癌是临床上最为常见的内分泌恶性肿瘤，近年来临床发病率呈现明显的升高，以及越来越年轻化的趋势，并且在目前的医学研究中证实，这一病症还会伴随着疾病谱的变化而导致临床发病率的逐渐升高。目前临床上用于诊断甲状腺癌的技术常见有：触诊法、影像学检查法和细胞学检查法等，但仍存在一次确诊率较低，需多次确诊等问题。触诊法无法识别真实的癌症发病情况；影像学检查法仅可获取早期或者晚期的癌症图像并无法对其进行癌症的确诊；细胞学检查法仅从细胞学角度做出诊断，对肿瘤的组织分型有一定的困难，并且仅对多数晚期癌症诊断效果明显。血液中常用的甲状腺激素测试指标(如T3、T4)无法反映癌症发病情况。总体来说，目前用于甲状腺癌诊断的方法较多，但是每种方法都存在一定的局限性，使得甲状腺癌的诊断比较困难。

因此，寻找一种能够用于甲状腺癌临床快速诊断和预后等相关的生物标志物成为实现甲状腺癌精准诊断的关键。

发明内容

MIT和DIT为甲状腺激素T4的合成前体物质，在甲状腺组织中表达稳定、恒定存在，具有高度特异性和有效性。本申请首次发现，MIT和DIT的表达量在甲状腺癌症组织和甲状腺正常组织中呈现极显著的差异，MIT和DIT在甲状腺癌症组织中的表达量低于正常组织中表达量的100-200倍。类似的差异现象在甲状腺癌细胞和正常细胞中也被检测到。基于此，MIT和DIT可作为甲状腺癌检测的生物标志物，相应的分析方法均可用于制备甲状腺癌检测试剂盒，为甲状腺癌检测、诊断、治疗以及预后评估提供一种新的技术手段。

具体地，本发明采用的技术方案如下：

本发明的一方面提供了一种MIT和/或DIT作为甲状腺癌标志物的应用。

优选地，MIT和/或DIT的测定方法包括：首先提取待测组织中的MIT和/或DIT，然后将MIT和/或DIT提取液进行SPTPP衍生化，再对SPTPP衍生化产物进行UPLC-MS/MS检测，得到待测组织中的MIT和/或DIT的含量。

进一步地，待测组织中的MIT和/或DIT的提取方法具体为：

0.1-1mg待测组织样品中加入50μl的甲醇内标溶液，将组织样本进行匀浆破碎，混匀置于低温0℃以下环境，15分钟后取出；大于8000g离心力，离心5-15分钟；向沉淀中加入50μl的甲醇萃取、离心、收集上清液，重复两次，将所得的上清液混合即得到MIT和/或DIT提取液。

更为优选地，所述甲醇内标溶液为¹³C₆-MIT浓度为100ng/L的甲醇内标溶液。

进一步地，MIT和/或DIT提取液进行SPTPP衍生化的具体方法包括：

向提取液中加入30μl PBS缓冲液，再向体系中加入20μl的SPTPP剂，密封涡旋混匀，40℃反应5分钟，反应结束后立刻将其置于冰上同时加入衍生反应碱化溶液终止反应，其中，

SPTPP衍生化反应中衍生试剂为30mM SPTPP的DMSO溶液；衍生反应缓冲溶液为0.1M的磷酸缓冲液(PBS、pH 8.0)；衍生反应终止溶液为1M的NaOH水溶液。