[发明专利]MIT和/或DIT作为甲状腺癌标志物的应用及试剂盒

权利要求书

1.检测MIT和/或DIT的试剂在制备用于甲状腺癌检测的试剂盒中的用途。

2.检测MIT和/或DIT的试剂在制备用于甲状腺癌的预后评估的试剂盒中的用途。

3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述甲状腺癌检测或所述甲状腺癌的预后评估是通过检测MIT和/或DIT的含量实现的，所述检测MIT和/或DIT的含量包括：首先提取待测甲状腺组织中的MIT和/或DIT，然后将MIT和/或DIT提取液进行SPTPP衍生化，再对SPTPP衍生化产物进行UPLC-MS/MS检测，得到待测组织中的MIT和/或DIT的含量。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述待测甲状腺组织中的MIT和/或DIT的提取方法包括：

0.1-1 mg待测组织样品中加入50μl的甲醇内标溶液，将组织样本进行匀浆破碎，混匀置于0°C以下环境，15分钟后取出；大于8000g离心力，离心5-15分钟；向沉淀中加入50μl的甲醇萃取、离心、收集上清液，重复两次，将所得的上清液混合即得到MIT和/或DIT提取液；所述甲醇内标溶液为¹³C₆-MIT浓度为100 ng/L的甲醇内标溶液。

5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述将MIT和/或DIT提取液进行SPTPP衍生化的方法包括：

向提取液中加入30μl PBS缓冲液，再向体系中加入20 μl的SPTPP剂，密封涡旋混匀，40°C反应5分钟，反应结束后立刻将其置于冰上同时加入衍生反应碱化溶液终止反应。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，SPTPP衍生化反应中衍生试剂为30 mM SPTPP的DMSO溶液；衍生反应缓冲溶液为0.1 M的pH 8.0磷酸缓冲液；衍生反应终止溶液为1M的NaOH水溶液。

7.如权利要求3用途，其特征在于，SPTPP衍生化产物进行UPLC-MS/MS检测前还包括：

将碱化后的衍生化MIT和/或DIT进行乙酸乙酯萃取净化：碱化的衍生化肿瘤标志物混合液中加入约等体积的乙酸乙酯，涡旋振荡10-15s，静置直至上层乙酸乙酯与下层水相出现明显分层，弃去上层乙酸乙酯，反复净化2-3次；

再将净化后的衍生化MIT和/或DIT进行酸化处理：向净化后的衍生产物混合物加入HCl水溶液，震荡混匀，所述HCl水溶液为5M的HCl水溶液，加入的体积为NaOH水溶液体积的1/4；

最后，将酸化后的衍生化MIT和/或DIT进行乙酸乙酯萃取：向酸化后的衍生产物中加入等体积的乙酸乙酯，涡旋震荡10-15s，静置直至上层乙酸乙酯与下层水相出现明显分层，收集上层乙酸乙酯，反复萃取2-3次，将收集的乙酸乙酯萃物进行微弱氮吹干，50 µL甲醇定容，再经UPLC-MS/MS分析。

8.如权利要求3所述的用途，其特征在于，SPTPP衍生化产物进行UPLC-MS/MS检测方法包括：

取衍生化MIT和/或DIT和MIT和/或DIT标准样衍生化制备的标准曲线溶液，通过UPLC-MS/MS进行测定，依据内标法，以内标矫正的峰面积对其进行相应浓度线性回归分析，计算待测组织样本中MIT和/或DIT的浓度。