[发明专利]一种用于黄鳝生殖干细胞的分离方法及培养基

权利要求书

1.一种用于分离培养黄鳝生殖干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：从黄鳝分离性腺组织；

S2：消化所述性腺组织，获得游离细胞；

S3：使用黄鳝生殖干细胞培养基培养所述游离细胞，使所述游离细胞中的黄鳝生殖干细胞贴壁和扩增，弃去液体即得到分离的所述黄鳝生殖干细胞；

所述黄鳝生殖干细胞培养基包括基础培养基和FBS，所述FBS的浓度为5-8%，所述基础培养基为RPMI1640；

所述黄鳝生殖干细胞培养基包还包括1-5%的KSR、1-5%的黄鳝血清、0.5-2 mM丙酮酸钠、1-4 mM L-谷氨酰胺、10-100 μM β-巯基乙醇、10-20 mM Hepes、5-30 ng bFGF和5-20ng EGF；

S2包括以下步骤：

S21：使用胰蛋白酶消化所述性腺组织，离心取沉淀，为消化产物；

S22：将所述消化产物重悬，用40 μm的细胞筛过滤，取滤液，离心沉淀重悬后得到所述游离细胞；

S3包括以下步骤：

S31：将所述游离细胞加入到装有所述培养基的培养容器中，于28±0.5℃下,5% CO₂下静置培养；

S32：培养60-84 h后，更换新鲜的所述培养基；

S33：每48 h更换一次新鲜的所述培养基，直至适当的细胞汇合度，弃去液体即得到分离的所述黄鳝生殖干细胞。