[发明专利]一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇、制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇、制备方法及应用，其技术方案要点是：双靶向纳米团簇，由多个巯基化的抗CD47和PD‑L1抗体通过MAL‑PEG‑SCM偶联到支化型聚乙烯亚胺上；双靶向纳米团簇的制备方法，具体包括以下步骤：S1、通过Traut's试剂分别将抗CD47抗体和抗PD‑L1抗体实现巯基化；S2、用异官能团修饰剂MAL‑PEG‑SCM修饰分子量为750kDa的支化型PEI，获得PEI‑MAL‑PEG‑SCM溶液；S3、用巯基化的抗CD47和PD‑L1抗体与PEI‑MAL‑PEG‑SCM溶液混合反应，制备得到双靶向纳米免疫团簇；本发明所采用的是抗CD47和PD‑L1抗体，既能充分发挥不同抗体抗原结合的联合作用，而且具有更好的普适性，其抗原结合能力良好，荧光标记后可用于膀胱癌的诊断。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇、制备方法及应用。

背景技术

膀胱癌是全球第十大最常见的癌症和我国发病率最高的泌尿系统恶性肿瘤。膀胱癌具有复发、进展率高，临床预后差的显著特点。PD-L1是肿瘤细胞表面“找不到我”的信号，是一种适应性免疫检查点，而CD47则是肿瘤细胞表面“不要吃我”的信号，是一种先天性免疫检查点，PD-L1和CD47在膀胱癌细胞表面均高表达。其中，CD47在超过80％的膀胱癌细胞上表达，而其表达水平在膀胱肿瘤干细胞中更高。在蓝光膀胱镜检查中使用荧光标记的CD47抗体诊断膀胱癌的敏感性和特异性分别为82.9％和90.5％，抗CD47单克隆抗体可通过阻断CD47抑制信号使巨噬细胞体外吞噬膀胱癌细胞。因此，将荧光标记的抗CD47单抗与抗PD-L1单抗联用，可用于膀胱癌的诊断，提高诊断效能，而且有希望能有效增强抗PD-L1单抗的疗效，减少膀胱癌的复发和进展，改善膀胱癌患者预后。

既往实验研究表明，通过联合使用分别抗PD-L1和CD47的单克隆抗体或者应用抗PD-L1和CD47的融合蛋白，相较于单种抗体，均可显著增强对乳腺癌和结肠癌小鼠模型的抗肿瘤作用。但是，不管是抗体联用还是双特异性融合蛋白，均是单个抗体，瘤内富集程度较低，副作用相对较大，限制了抗体联合治疗的效果。

纳米药物可通过增强渗透和滞留效应增加其在肿瘤内的富集，而加载其上的不同抗体则可实现主动靶向和协同抗肿瘤作用。因此，可以通过纳米技术将多个不同的单克隆抗体连接成一个整体，充分发挥不同抗体的抗原靶向诊断和治疗作用。

前期，我们团队“新一代多功能抗体纳米团簇的制备及其协同治疗应用”专利中采用PEI连接I型和Ⅱ型CD20抗体构建了一种纳米团簇用于淋巴瘤的治疗，其效果良好，但是依旧存在着一些弊端，如：其靶向抗原单一，应用病种单一，且无法充分发挥不同抗体抗原结合的联合作用，而且普适性较差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇、制备方法及应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇，由多个巯基化的抗CD47和PD-L1抗体通过MAL-PEG-SCM偶联到支化型聚乙烯亚胺上。

优选的，所述双靶向纳米免疫团簇中的骨架为聚乙烯亚胺PEI,铰链为马来酰亚胺-聚乙二醇-琥珀酰亚胺MAL-PEG-SCM。

优选的，所述双靶向纳米免疫团簇中所含的抗体为抗CD47抗体和抗PD-L1抗体。

优选的，所述双靶向纳米免疫团簇为树枝状，尺寸为100-200nm。

本发明还提供了一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇的制备方法，具体包括以下步骤：

S1、通过Traut's试剂分别将抗CD47抗体和抗PD-L1抗体实现巯基化；