[发明专利]一种基于亚麻环肽A切割DNA的方法

说明书

本发明公开了一种基于亚麻环肽A切割DNA的方法，属于生物技术领域。本发明利用亚麻环肽A对DNA进行切割，在适合的条件下，使得切割效率可达100％，且为自由基切割，可对DNA造成不可逆的损伤，对探索植物环肽与DNA的作用以及设计新的DNA结构探针等方面具有一定的指导意义，并使其在药物研发领域作为新的抗肿瘤药物成为可能。

技术领域

本发明涉及一种基于亚麻环肽A切割DNA的方法，尤其是涉及一种新型的DNA切割剂“亚麻环肽A”，属于生物技术领域。

背景技术

核酸是重要的生物大分子，而且是生物体的重要组成物质，遗传信息的携带者和基因表达的物质基础，它在生物的生长、发育和繁殖等活动中，具有非常重要的作用。核酸的结构直接影响其功能，并与致癌、抗癌有关。所以如何有效操纵核酸分子不仅在癌症等疾病治疗方面，而且在生物技术本书都具有潜在的应用价值。通过对核酸切割剂的研究可以获得生物体内的一些重要信息，提供生物体内核酸酶的作用机制，在医药及生物方向具有极大的研究价值，因而核酸切割剂一直是生物学最为活跃的前沿领域之一。

植物环肽(plant cyclopeptides)一般是指高等植物中主要由氨基酸肽键形成的一类环状含氮化合物。亚麻环肽是一般指从亚麻籽中提取的疏水环亚麻肽。环肽A是由脯氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-异亮氨酸-亮氨酸-缬氨酸初级序列构成的的九肽。亚麻中的环肽A作用还不清楚，在目前的研究中，这些肽显示出有效的免疫抑制活性，因此其可作为多肽药物设计中的模板分子进行结构修饰或活性多肽的载体。由于植物环肽具有更好的生物活性，且具有极大的药用和功能食品潜力，随着研究的不断深入，植物环肽也将获得更大的经济价值。

目前，国内外的研究主要集中在植物环肽的提取、分离、结构与性质、序列的同源性及分类、结构鉴定、化学合成、生物合成、生物活性及应用前景等。但是，未见有研究环肽与DNA间的相互作用研究。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，筛选获得了一种具有切割DNA作用的亚麻环肽A(CLA)，并且在适当的条件下能够起到很好的切割效果。为DNA的切割提供了一种新思路。

本发明提供了一种DNA的切割方法，其特征在于，利用环肽切割DNA。

在本发明的一种实施方式中，所述环肽结构式为：

在本发明的一种实施方式中，反应时间为2～24小时。

在本发明的一种实施方式中，反应时间优选为12～24小时。

在本发明的一种实施方式中，金属离子包括Mg²⁺，Cu²⁺，Zn²⁺或Ca²⁺。

在本发明的一种实施方式中，金属离子优选为Mg²⁺或Ca²⁺。

在本发明的一种实施方式中，金属离子浓度为1～100mM。

在本发明的一种实施方式中，金属离子浓度优选为50～100mM。

在本发明的一种实施方式中，反应体系中的pH为6.0～7.0。

在本发明的一种实施方式中，环肽的浓度为5～37.5mg/L。

在本发明的一种实施方式中，环肽的浓度优选为25～37.5mg/L。

在本发明的一种实施方式中，反应体系中含有目的DNA和BR缓冲液。

在本发明的一种实施方式中，目的DNA终浓度为0.01-0.02mg/mL，BR缓冲液的终浓度为100-120mmol/L。

本发明提供了一种切割DNA的试剂盒，所述试剂盒中含有环肽、BR缓冲液、金属离子。