[发明专利]一种人血浆及尿液中氟乙酸浓度的快速检测方法

说明书

本发明涉及一种人血浆及尿液中氟乙酸浓度的快速检测方法，属于药物分析技术领域。为解决现有氟乙酸检测方法前处理复杂、检测时间长、灵敏度低的问题，本发明提供了一种人血浆及尿液中氟乙酸浓度的快速检测方法，具体步骤包括确定LC‑LS/MS检测条件、配制氟乙酸及内标碘乙酸标准工作液、建立血浆及尿液中氟乙酸浓度标准曲线及回归方程、对待测血浆及尿液进行前处理，所得样本进行LC‑LS/MS检测并利用相应回归方程计算得出血浆及尿液中氟乙酸的浓度。本发明建立了简单的人血浆及尿液前处理方法，提高了氟乙酸检测灵敏度，能够在短时间内准确检测出血浆或尿液中氟乙酸的浓度，为临床有机氟中毒的快速诊断及解救提供重要参考。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，尤其涉及一种人血浆及尿液中氟乙酸浓度的快速检测方法。

背景技术

有机氟类杀鼠剂主要成分包括氟乙酸钠和氟乙酰胺等，由于其具有剧毒，目前已被世界许多国家和地区禁止生产及使用。但近年来，由于误服或投毒导致的有机氟中毒事件仍时有发生，有机氟类杀鼠剂也是急诊科常见的易中毒物质之一。

有机氟类杀鼠剂在人体内可迅速代谢成氟乙酸，通过氟乙酸阻断机体正常的三羧酸循环，引起机体一系列毒性反应，包括神经系统损伤及心脏损伤等，严重可危及患者的生命。有机氟杀鼠剂中毒后可以引起患者恶心、呕吐、抽搐、昏迷，重度中毒可致心力衰竭。中毒患者入院后往往意识不清，医生仅根据症状难以对患者进行诊断。此外，有机氟中毒后的症状与癫痫难以区分，缺乏经验的医生可能会误诊为癫痫，延误中毒患者的抢救及治疗。

因此，快速准确地测定中毒患者血浆及尿液中氟乙酸的浓度，对于医生临床救治中毒患者具有重要的参考价值。目前，文献中报道的氟乙酸检测方法多数通过GC来进行检测，但该方法需要衍生化，前处理复杂，检测分析时间长。也有文献通过LC-MS/MS进行分析，由于氟乙酸是分子量小的极性物质，在普通C18色谱柱上不保留，需要复杂的流动相增加氟乙酸在色谱柱上的保留行为，这些缺陷限制了LC-MS/MS法检测氟乙酸的推广。

发明内容

为解决现有氟乙酸检测方法前处理复杂、检测时间长、灵敏度低的问题，本发明提供了一种人血浆及尿液中氟乙酸浓度的快速检测方法。

本发明的技术方案：

一种人血浆中氟乙酸浓度的快速检测方法，包括如下步骤：

步骤一、确定LC-LS/MS检测条件：

LC-LS/MS的色谱条件为：

色谱柱为HILIC色谱柱；流动相体积比为：乙腈:5mmol甲酸铵＝90:10；

流动相总流速0.4mL/min；进样量20μL；柱温为40℃；

LC-LS/MS的质谱条件为：

离子源采用ESI电喷雾离子源，扫描模式为负离子MRM扫描；

步骤二、配制标准工作液：

分别配制不同浓度的氟乙酸标准工作液和内标碘乙酸标准工作液；

步骤三、建立血浆中氟乙酸浓度标准曲线及回归方程：

将空白血浆分别与步骤二配制的不同浓度氟乙酸标准工作液混匀，得到不同浓度的血浆氟乙酸校准样本，按体积比分别向不同浓度血浆氟乙酸校准样本中加入内标碘乙酸标准工作液混匀，沉淀蛋白、离心、过滤后得到不同浓度的血浆氟乙酸标准样本，所得各浓度血浆氟乙酸标准样本分别按步骤一确定的LC-LS/MS检测条件进行检测；

以不同浓度血浆氟乙酸峰面积与内标碘乙酸峰面积的比值为纵坐标y，以氟乙酸在血浆中的浓度为横坐标x，得到血浆中氟乙酸浓度的标准曲线，进行直线回归，得血浆中氟乙酸浓度的回归方程；

步骤四、待测血浆前处理：