[发明专利]一种人血浆及尿液中氟乙酸浓度的快速检测方法

权利要求书

1.一种人血浆中氟乙酸浓度的快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、确定LC-MS/MS检测条件：

LC-MS/MS的色谱条件为：

色谱柱为HILIC色谱柱；流动相体积比为：乙腈:5mmol甲酸铵＝90:10，其中甲酸铵中含有体积浓度0.2％的甲酸；

流动相总流速0.4mL/min；进样量20μL；柱温为40℃；

LC-MS/MS的质谱条件为：

离子源采用ESI电喷雾离子源，扫描模式为负离子MRM扫描；

步骤二、配制标准工作液：

分别配制不同浓度的氟乙酸标准工作液和内标碘乙酸标准工作液；

步骤三、建立血浆中氟乙酸浓度标准曲线及回归方程：

将空白血浆分别与步骤二配制的不同浓度氟乙酸标准工作液混匀，得到不同浓度的血浆氟乙酸校准样本，按体积比分别向不同浓度血浆氟乙酸校准样本中加入内标碘乙酸标准工作液，旋涡30s，再分别加入600μL乙腈沉淀蛋白，旋涡振荡30s，将混匀后的样本放入低温离心机中4℃条件下15000r/min离心10min，取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤得到不同浓度的血浆氟乙酸标准样本，所得各浓度血浆氟乙酸标准样本分别按步骤一确定的LC-MS/MS检测条件进行检测；

以不同浓度血浆氟乙酸峰面积与内标碘乙酸峰面积的比值为纵坐标y，以氟乙酸在血浆中的浓度为横坐标x，得到血浆中氟乙酸浓度的标准曲线，进行直线回归，得血浆中氟乙酸浓度的回归方程；

步骤四、待测血浆前处理：

精密量取待测血浆200μL置于1.5mL EP管中，加入20μL步骤二配制的内标碘乙酸标准工作液，旋涡混匀后加入600μL乙腈，旋涡振荡1min，4℃条件下15000r/min离心5min，取上清液过滤后用0.22μm微孔滤膜过滤，得到待测血浆样本；

步骤五、待测血浆样本检测与数据处理：

将步骤四所得待测血浆样本按步骤一确定的LC-MS/MS检测条件进行检测，由峰面积定量，保留时间定性，利用步骤三得出的回归方程计算得出血浆中氟乙酸的浓度。

2.根据权利要求1所述一种人血浆中氟乙酸浓度的快速检测方法，其特征在于，步骤一中LC-MS/MS的质谱条件还包括，氟乙酸的母离子：m/z＝77，定量子离子m/z＝57，定性子离子m/z＝32，碘乙酸母离子m/z＝184.8，子离子m/z＝126.8。

3.根据权利要求1或2所述一种人血浆中氟乙酸浓度的快速检测方法，其特征在于，步骤二配制的氟乙酸标准工作液的浓度依次为2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、500μg/mL和1000μg/mL；内标碘乙酸标准工作液的浓度为200μg/mL。

4.根据权利要求3所述一种人血浆中氟乙酸浓度的快速检测方法，其特征在于，步骤三所述血浆氟乙酸校准样本的浓度依次为0.25μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL和100μg/mL，步骤三所述血浆氟乙酸校准样本与内标碘乙酸标准工作液的体积比为10:1；步骤三所得血浆中氟乙酸浓度的回归方程为y＝0.00943x+0.00936，r²＝0.9962。

5.根据权利要求4所述一种人血浆中氟乙酸浓度的快速检测方法，其特征在于，步骤四所述待测血浆样本与内标碘乙酸标准工作液的体积比为10:1。