[发明专利]一株耐高温沙门氏菌噬菌体RDP-SA-18056及其微胶囊的制备工艺

权利要求书

1.一株耐高温沙门氏菌噬菌体(Salmonella Gallinarum phage)RDP-SA-18056，该噬菌体在双平板上能形成直径在2mm-4mm的噬菌斑；透过电镜观察，该噬菌体有一个多面体立体对称的头部，包裹着核酸，直径约50nm，有一个长约200nm的尾，有尾鞘，颈部连着头部和尾部；为有尾病毒目(Caudovirales)长尾病毒科(Siphoviridae)，保藏编号CGMCCNo.19293。

2.一种如权利要求1所述的耐高温沙门氏菌噬菌体RDP-SA-18056微胶囊的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：

(1)种子制备：

a、宿主种子制备：无菌环境下挑取单菌落接种于5mL的LB液体培养基，37℃，200rpm培养4-6h，将培养后的宿主菌以5％的接种量接种于100mL的LB液体培养基，37℃，200rpm培养4-6h，再以5％的接种量接种于1000mL的LB液体培养基，37℃，150rpm培养4-6h，培养好的宿主菌种子置于4℃冰箱备用；

b、噬菌体种子制备：将保存的噬菌体种子适当稀释后，取200μL与步骤a中培养好的200μL宿主菌置于上层培养基中，倒双层平板，37℃，培8-12h，选取噬菌斑呈现云雾状的平板，用5mL的LB液体培养基洗下上层培养基，然后12000rpm，10min离心，过0.22μm的滤膜，收集清液；

清液与步骤a中培养好的宿主菌分别以2％的比例接种于5mL的LB培养基，37℃，200rpm培养4-8h，将培养好的噬菌体和宿主菌各以2％的接种量同时接种于100mL的LB液体培养基，37℃，200rpm培养4-8h，再将培养好的噬菌体和宿主菌各以2％的接种量同时接种于1000mL的LB液体培养基，37℃，200rpm培养4-8h，培养好的噬菌体种子置于4℃冰箱备用；

(2)噬菌体增殖：

将步骤a中培养好的宿主菌以3％的比例接种于种子发酵罐中，培养3-4h后，OD600值在0.7-0.9，再将宿主菌通过移种管道接种于发酵罐，接种量为5％，在发酵罐中培养3-4h，OD在0.7-0.9时以5％的接种量接入噬菌体，培养6-8h，待溶氧反升，pH趋于稳定，结束增值；

其中，发酵罐参数为：种子罐200-300rpm，37℃，通气1:0.6-0.8vvm；发酵罐：120-150pm，37℃，通气1：0.6-0.8vvm；

发酵罐中培养基成分为：酵母浸粉2.5％，甘油0.3％，氯化钠0.8％，磷酸二氢钾0.2％，磷酸氢二钾0.2％，氯化钙20ppm，氯化镁20ppm；

(3)噬菌体后处理工艺：

A、离心：将增殖完成的噬菌体，用管式离心机离心，14000rpm，流速≤30L/H，去除步骤(2)中未裂解的宿主菌和细菌碎片等；

B、采用400nm的中空纤维膜进一步过滤除菌；

C、采用100KD的卷式膜进行浓缩；

D、过滤除菌：浓缩后的噬菌体采用三级过滤除菌；

(4)噬菌体低温喷雾干燥：

将过滤除菌后的噬菌体液体加入载体并搅拌均匀，载体为：8％多空淀粉，2％聚乙烯吡咯烷酮，1％乳糖，0.5％改性壳聚糖，0.2％维生素C；然后进行温喷雾干燥，参数：进风口温度150℃，出风口温度75℃。

3.根据权利要求2所述的耐高温沙门氏菌噬菌体RDP-SA-18056微胶囊的制备工艺，其特征在于，制备后的噬菌体RDP-SA-18056微胶囊微观结构呈凹面空腔。