[发明专利]白斑综合征病毒VP28基因、重组蛋白、多克隆抗体及制备方法和应用

说明书

本发明属于分子生物学基因工程领域，涉及克氏原螯虾白斑综合征病毒（White Spot Syndrome Virus,WSSV）VP28基因的核苷酸序列和所编码的氨基酸序列、以及密码子优化后的核苷酸序列，尤其涉及WSSVVP28蛋白的重组表达制备方法和抗兔多克隆抗体的制备。通过重组表达WSSVVP28蛋白可以进一步在体外分析该蛋白的结构和功能，另外多克隆抗体的制备能够为进一步检测虾体内WSSV的含量奠定基础。

技术领域

WSSV的VP28基因的核苷酸序列和所编码的氨基酸序列、以及密码子优化后的核苷酸序列，尤其涉及WSSV的VP28蛋白的重组表达制备方法和抗兔多克隆抗体的制备。通过重组表达WSSV的VP28蛋白可以进一步在体外分析该蛋白的结构和功能，另外多克隆抗体的制备能够为进一步检测鱼虾内WSSV的含量奠定基础。

背景技术

WSSV的VP28是目前研究最多的白斑综合征病毒囊膜蛋白，蛋白是病毒最主要的组成成分之一，包括结构蛋白和非结构蛋白两大类。WSSV的结构蛋白包括囊膜蛋白、核衣壳蛋白和被膜蛋白三个部分，它们维持着病毒的基本结构，并保护病毒的核酸，同时参与病毒对宿主组织细胞的识别、吸附及侵入。非结构蛋白大多是一些催化、调节病毒复制的酶类和调控蛋白。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了白斑综合征病毒VP28基因、重组蛋白、多克隆抗体及制备方法和应用，以解决缺少克氏原螯虾WSSVVP28检测抗体，无法进行WSSV测定等问题。

本发明的技术方案如下：

一种白斑综合征病毒VP28基因，所述VP28基因命名为WSSVVP28，序列如SED ID NO：1所示。

一种密码子优化后的白斑综合征病毒VP28基因，其序列如SED ID NO：2所示。

一种白斑综合征病毒VP28重组蛋白，其氨基酸序列如SED ID NO：3所示。

一种白斑综合征病毒VP28重组蛋白的制备方法，包括：将白斑综合征病毒VP28密码子优化基因序列SED ID NO：2连入PET-B2M表达载体得到pET-B2M- WSSVVP28重组质粒；

将pET-B2M- WSSVVP28重组质粒转化入大肠杆菌中，培养，诱导，裂解，纯化，得到白斑综合征病毒VP28重组蛋白。

在一些实施例中，将密码子优化后的序列 SEQ ID No.2进行合成，并直接连入PET-B2M载体，转化进入大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导表达，收集菌体进行SDS-PAGE蛋白检测，超声破碎裂解细菌，纯化重组蛋白。

进一步的，转化步骤为：向感受态细胞E. coli BL21中加入pET-B2M-WSSV-VP28重组质粒，轻轻混匀，在冰浴中静置5 min，后置于42℃水浴热激90 s，迅速转移至冰浴中。向每个离心管中加入900 μL的无菌LB培养基，混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min，使菌体复苏，然后吸取100 μL复苏的菌液涂布在含有卡纳青霉素抗性的LB固体培养基上，37℃培养 12-16 h。

进一步的，诱导表达步骤为：挑选含有重组质粒的大肠杆菌，加入液体培养基，37℃震荡培养直至菌液OD600＝0.4～0.6，加入适量IPTG至终浓度1 mM，诱导表达4h后，收集菌体，并用灭菌水重悬菌体，放入-80℃冻存，并反复冻融1-2次；取冻融后的重悬菌体在冰浴条件下进行超声波破碎，离心收集破碎后的上清液，并进行SDS-PAGE电泳检测。

进一步的，破碎条件为：破碎4 s，间隔3 s，破碎30 min。