[发明专利]一种全菌胶囊及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种全菌胶囊的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)利用高通量测序筛选粪菌供体；

(2)收集步骤(1)筛选的粪菌供体的粪便，制备粪菌液；

(3)将步骤(2)制备的粪菌液和冻干保护剂混合后进行降温冷冻和真空干燥，得到的粪菌冻干粉装入胶囊壳内，得到所述全菌胶囊；

步骤(1)所述利用高通量测序筛选粪菌供体的方法包括以下步骤：

(1’)将提取自粪菌供体的DNA和/或RNA进行二代测序，获得原始测序数据；

(2’)去除原始测序数据的宿主基因后，与微生物数据库进行比对，进行菌种鉴定和丰度检测；

(3’)与致病菌数据库进行比对，确认粪菌供体中无致病菌；

(4’)与粪菌受体的肠道菌群进行比较，筛选得到与粪菌受体互补的粪菌供体；

步骤(1)所述利用高通量测序筛选粪菌供体根据粪菌供体表达的生物标志物和所述生物标志物的多样性指数；

所述生物标志物包括大肠杆菌、多支梭菌、柱状真杆菌、人罗斯拜瑞氏菌、普拉梭菌、脆弱拟杆菌和普通拟杆菌；

所述生物标志物的多样性指数包括所述生物标志物的α多样性指数；

筛选的粪菌供体表达生物标志物大肠杆菌、多支梭菌、柱状真杆菌、人罗斯拜瑞氏菌、普拉梭菌、脆弱拟杆菌和普通拟杆菌，生物标志物的α多样性为163804.8，其中，健康正相关的生物标志物为多支梭菌、柱状真杆菌、人罗斯拜瑞氏菌、普拉梭菌和普通拟杆菌，健康负相关的生物标志物为大肠杆菌和脆弱拟杆菌；

在健康人群中，对每个健康正相关的微生物进行boxplot分析，得出每个微生物的中位值；在患者中，对每个健康负相关的微生物进行boxplot分析，得出每个微生物的中位值；将每个微生物的中位值作为供体筛选的标准值；

粪菌供体的筛选标准为：每个健康正相关的微生物的值大于该微生物的标准值，每个健康负相关的微生物的值小于该微生物的标准值。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2’)所述微生物数据库包括来源于公共数据库的细菌基因组、真菌基因组或病毒基因组中的任意一种或至少两种的组合。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3’)所述致病菌数据库包括来源于公共数据库的致病菌基因组。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述粪菌液的制备方法包括以下步骤：

(1”)将收集的粪便浸泡于无菌生理盐水中，过滤后得到粪便滤液；

(2”)将粪便滤液离心处理，取沉淀与无菌生理盐水混合，得到所述粪菌液。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1”)所述无菌生理盐水的温度为3～5℃。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1”)所述过滤采用滤网进行。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述滤网的孔径为0.25～2mm。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(1”)所述过滤包括依次使用2.0mm、1.0mm、0.5mm和0.25mm的滤网去除大颗粒物，随后使用0.25mm的滤网过滤2～3次，得到的液相为粪便滤液。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2”)所述离心处理的转速为1500～3000r/min。

10.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2”)所述离心处理的时间为10～20min。

11.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述冻干保护剂包括脱脂乳粉、海藻糖、蔗糖、维生素C和无菌生理盐水。