[发明专利]一种去除毕赤酵母表达重组蛋白聚集体和/或降解片段的方法

权利要求书

1.一种去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，其特征在于采用多模式色谱树脂对含有毕赤酵母表达重组蛋白的发酵液进行纯化，并且在发酵液上样步骤和洗脱步骤之间包括乙醇淋洗的步骤；所述多模式色谱树脂为Capto MMC^TM，所述乙醇淋洗步骤的预洗液含有5-20%的乙醇，所述的毕赤酵母重组表达蛋白为SEQ ID NO:7所示人血清白蛋白-人粒细胞集落刺激因子融合蛋白。

2.如权利要求1所述去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，其特征在于还包括高盐缓冲液预洗步骤、高pH缓冲液预洗步骤。

3.如权利要求1-2任一所述去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，其包括：

（1）发酵液上样：层析柱用平衡缓冲液平衡后上样，上样结束后再平衡；

（2）乙醇淋洗液预洗：采用含5-20%的乙醇淋洗液预洗；

（3）高盐缓冲液预洗：采用含1M NaCl、pH5.5的预洗缓冲液预洗；

（4）高pH缓冲液预洗：采用pH6.8的缓冲液预洗；

（5）洗脱缓冲液洗脱。

4.如权利要求3所述去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，其还包括对层析柱流出液进行SEC-HPLC和非还原SDS-PAGE检测。

5.如权利要求3所述去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，其特征在于：

所述平衡缓冲液为20mM NaAc+5mM EDTA+0.15M NaCl，

所述预洗液为含5%、10%、15%或20%乙醇（m/v）的5mM EDTA溶液，

所述高盐缓冲液为40mM NaAc pH5.5+1M NaCl，

所述pH缓冲液为40mM PB pH6.8+5mM EDTA-2Na，

所述洗脱缓冲液为50mM Tris-HCl+5mM EDTA-2Na+0.3M NaCl pH8.0。

6.权利要求1-5任一所述方法在纯化毕赤酵母重组表达蛋白、制备毕赤酵母重组表达蛋白单体、和/或提高毕赤酵母重组表达蛋白单体比例中的应用，所述的毕赤酵母重组表达蛋白为SEQ ID NO:7所示人血清白蛋白-人粒细胞集落刺激因子融合蛋白。

7.如权利要求6所述应用，其特征在于所述重组表达蛋白的单体比例超过65%。