[发明专利]一种结核分枝杆菌复合群的LAMP快速检测试剂盒及方法

说明书

本发明提供了一种检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)的LAMP检测试剂盒和检测方法，属于微生物分子检测领域。本发明由于设计了高度特异性的引物(如SEQ ID NO.1～4所示)，相比现有技术，本发明的方法兼具了简便、快速、高灵敏度的优点。本发明在结核分枝杆菌复合群检测中具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及微生物分子检测领域。

背景技术

结核分枝杆菌复合群(mycobacterium tubercu1osis，MTBC)是肺内及肺外结核共同的病原菌，包括人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌。目前,有超过三分之一的世界人口感染结核。根据2016年WHO全球结核调查报告显示，2015年全球有1040万新发结核病人，中国的新发病例仅次于印度。研究结果显示中国潜伏期结核比例在13％～20％。中国仍是全球22个结核高负担国家之一。现阶段结核病控制、预防与治疗最好的手段就是通过早期快速准确的诊断和完善治疗体系。因此，开发可用于结核病致病菌早期实时、快速诊断技术，或许是帮助我们有效防治结核病的根本方法。

目前大多数发展中国家，对结核病的诊断主要是通过观察临床标本中(如痰液)是否存在结核分枝杆菌，如细菌涂片镜检和培养等，该法需要的设备简易，操作容易掌握，但存在着检测周期长、灵敏度低和特异性低等问题，这样很难及时诊断结核病，不利于结核病的诊断与控制。

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)，是一种新型的核酸扩增方法，其特点是针对靶基因的6个区域设计4-6种特异引物，在链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)的作用下，60～65℃恒温扩增，15-60分钟左右即可实现核酸有效扩增，具有操作简单、特异性强、产物易检测等特点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简便、快捷准确地检测结核分枝杆菌复合群的LAMP检测试剂盒及方法。

本发明的技术方案包括：

一种LAMP引物，序列如SEQ ID NO.1～4所示。

一种结核分枝杆菌复合群的LAMP检测试剂盒，它包括：序列如SEQ ID NO.1～4的引物。

如前述的试剂盒，它还包括：

商业化的LAMP Mix；LAMP酶、镁离子、dNTP以及LAMP用缓冲液。

如前述的试剂盒，所述商业化的LAMP Mix与引物被混在同一个分散系中。

一种非疾病诊断目的的结核分枝杆菌复合群检测方法，它是使用如权利要求2～4任一所述试剂盒进行LAMP检测的方法。

如前述的检测方法，所述检测的待检样本为：死亡人体来源的样本、死亡动物体来源的样本或环境来源样本。

如前述的检测方法，它包括如下LAMP程序：60～65℃，15～60min。

如前述的检测方法，反应温度是65℃恒温。

如前述的检测方法，反应时间为50min。

本发明具有如下有益效果：

1)特异性强

本发明的试剂盒和方法可以特异性检测出样品中的结核分枝杆菌复合群，所检测的阴性对照细菌和水对照均无阳性结果出来。

2)灵敏度高

本发明的试剂盒和方法的最低检测限约为1.0×10^-3ng/μL。

3)简单快速

本发明使用“一步法”LAMP，理论上的LAMP扩增时间为50min，这大大缩减了检测时间。