[发明专利]纯品多糖制备寡糖的方法

说明书

本发明属于寡糖的制备技术领域，具体的涉及一种纯品多糖制备寡糖的方法。将从红曲霉发酵液中提取得到的纯品多糖溶于酸性溶液中，控制纯品多糖溶液浓度为1‑3％，分装于多个EP小管中，然后分别在不同温度的水中进行降解；反应结束后，除去酸性溶液，加水进行溶解，然后加入无水乙醇醇沉，离心收集上清部分，浓缩烘干，制备得到粗寡糖；采用凝胶柱层析法对粗寡糖混合物进行分离纯化，收集后检测糖含量，作洗脱曲线图，收集各个主峰部分浓缩烘干，制备得到寡糖。本发明所述的纯品多糖制备寡糖的方法，工艺简单，对寡糖的结构及其生物活性影响小，且实现了寡糖混合物的分离和成分的确定。

技术领域

本发明属于寡糖的制备技术领域，具体的涉及一种纯品多糖制备寡糖的方法。

背景技术

寡糖是由2-9个单糖聚合而成，通过糖苷键连接成直链或者带直链的低聚合度糖类物质，又可称为低聚糖，分子式一般可表示为(C₆H₁₀O₅)_n(n＝2-9)，分子量约300-2000道尔顿。寡糖独特的结构使其在理化性质、生理功能等方面与单糖及多糖有着显著的差异。寡糖及其衍生物是一类重要的具有生物活性的物质，能够促进双歧杆菌的生长，具有低热量、抗蛀牙、抗肿瘤和防治糖尿病等多种特点与功能，最近的研究发现，寡糖还具有抗凝血、抗氧化和调节免疫系统等作用。

寡糖在植物体中普遍存在，并且存在的方式多种多样，大多数植物的果实和种子中都含有较多的寡糖及其同类物质，构成寡糖的单糖主要包括木糖、半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、果糖等。现在已确定的寡糖有上千种，按照组成寡糖的单糖的不同可以分为同寡糖和杂寡糖，同寡糖是由同一种单糖聚合而成的寡糖，杂寡糖是由两种或两种以上不同种类的单糖聚合而成的寡糖。

寡糖的分离纯化是将混合糖中各种不同聚合度、不同结构的糖进行分离，获得较高纯度寡糖的过程。由于寡糖具有相近的官能团，多种不同的异构体，多样的连接方式和分支形式，并且寡糖分子本身缺乏发色基团或荧光基团，检测相对困难，所以寡糖混合物的分离是研究的重点和难点。

发明内容

本发明的目的是：提供一种纯品多糖制备寡糖的方法。该方法工艺简单，对寡糖的结构及其生物活性影响小，且实现了寡糖混合物的分离和成分的确定。

本发明所述的纯品多糖制备寡糖的方法，由以下步骤组成：

(1)将从红曲霉发酵液中提取得到的纯品多糖溶于酸性溶液中，控制纯品多糖溶液浓度为1-3％，分装于多个EP小管中，然后分别在不同温度的水中进行降解；

(2)反应结束后，除去酸性溶液，加水进行溶解，然后加入无水乙醇醇沉，离心收集上清部分，浓缩烘干，制备得到粗寡糖；

(3)采用凝胶柱层析法对粗寡糖混合物进行分离纯化，收集后检测糖含量，作洗脱曲线图，收集各个主峰部分浓缩烘干，制备得到寡糖。

其中：

步骤(1)中所述的纯品多糖为经过纯化后糖含量达98％以上，经凝胶渗透色谱检测只有单一对称峰的纯品多糖。

步骤(1)中所述的酸性溶液为硫酸、盐酸或三氟乙酸中的一种，浓度为0.01mol/L或0.05mol/L；优选浓度为0.01mol/L的盐酸。

步骤(1)中所述的降解温度为70℃-90℃，降解时间为2-4h；优选于70℃水中降解2h。

步骤(1)中所述的EP小管的个数为60-100个。

步骤(1)所说的降解过程中，每间隔20-30min进行取样，采用高效薄层色谱法对降解产物进行研究，并选择一定降解条件下的降解产物进行凝胶色谱分析和硫酸-苯酚法检测，查看降解产物的分布情况，确定降解条件。

步骤(2)中所述的水的加入量为样品体积的3-5倍，加入无水乙醇的量为样品溶解后的水溶液体积的10-15倍。