[发明专利]一种湖羊精液低温保存稀释液配方的制备方法及其使用方法

说明书

本发明涉及一种湖羊精液低温保存稀释液配方的制备方法及其使用方法，包括以下步骤：步骤1）、将7.0～8.0gTris、4.0～5.0g柠檬酸、4.0～6.0g果糖溶解于250mL超纯水中，然后使用0.22µm滤膜过滤除菌，得到基础稀释液；步骤2）、卵黄的分离，用酒精棉球擦拭鸡蛋表壳，将鸡蛋小心打开，置于滤纸上，缓慢晃动滤纸以吸附蛋清，待彻底吸附蛋清后，使用注射器插入卵黄内部吸取卵黄；步骤3）、取220mL～230mL经步骤1）制备的基础稀释液，加入20mL～30mL卵黄，震荡后，在4℃冰箱过夜，然后离心取上清，加入0.1～0.2g青霉素钠、0.3～0.4g链霉素硫酸盐，得到低温保存稀释液。通过本发明,可延长精液的存活时间，提高精液的保存质量。

技术领域

本发明涉及一种湖羊精液低温保存稀释液配方的制备方法及其使用方法，属于湖羊繁殖技术领域。

背景技术

湖羊原产于太湖平原，是世界上著名的多肽绵羊品质，具有每胎多羔、四季发情、生长发育快、繁殖性能优良、耐高温高湿等特点，因此深受养殖户喜爱，饲养规模逐渐扩大。

人工授精技术已经应用于规模化羊场的饲养管理中，该技术可以充分利用种公畜的精液，减免自然交配造成的精液浪费，避免一些疾病的发生，同时结合同期发情技术，可以实现羊场的规模化饲养管理，大大的减少资金投入。人工授精技术的核心是精液的保存技术，精液保存通常分为常温保存、低温保存和超低温保存。相比于低温保存，精液的常温保存，由于现在投入使用的稀释液配方，其保存时间较短，暂时不能很好的应用于实际生产中。同时由于湖羊精子结构的特殊性，湖羊精液的超低温冷冻保存技术尚存在一些技术难题，也不能很好的应用于实际生产中。因此，湖羊精液的低温保存则成了现阶段规模化羊场首选的精液保存技术。

目前现有的湖羊精液低温保存稀释液配方，其保存效果不佳，在精液保存4天左右时，精子活力降低到40％左右，远远不能满足实际生产需要。精液保存过程中，不可避免的会产生一定量的活性氧，对精液保存产生损害。为此，有必要在低温保存稀释液中添加一定量的维生素C，通过分析不同常温保存温度下湖羊精子活率、死亡率、活力、运动性能等的变化情况，筛选出相对较好的湖羊精液低温保存稀释液配方，以期为湖羊精液低温保存技术在生产实践中推广应用提供参考依据，降低精液保存成本，满足生产实践需要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种湖羊精液低温保存稀释液配方的制备方法及其使用方法，用于解决现有技术中，湖羊精液常温保存时间较短，现有的低温保存稀释液配方仍然不能满足需求，延长精液的存活时间，提高精液的保存质量。

本发明的目的是这样实现的，一种湖羊精液低温保存稀释液配方的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)、将7.0～8.0gTris、4.0～5.0g柠檬酸、4.0～6.0g果糖溶解于250mL超纯水中，然后使用0.22μm滤膜过滤除菌，得到基础稀释液；

步骤2)、卵黄的分离，用酒精棉球擦拭鸡蛋表壳，将鸡蛋小心打开，置于滤纸上，缓慢晃动滤纸以吸附蛋清，待彻底吸附蛋清后，使用注射器插入卵黄内部吸取卵黄；

步骤3)、取220mL～230mL经步骤1)制备的基础稀释液，加入20mL～30mL卵黄，震荡后，在4℃冰箱过夜，然后离心取上清，加入0.1～0.2g青霉素钠、0.3～0.4g链霉素硫酸盐，得到低温保存稀释液。

步骤1)中，250mL超纯水在使用前先放置于高压灭菌锅中用120～125℃灭菌处理20～40min。

250mL超纯水在使用前先放置于高压灭菌锅中用121℃灭菌处理30min。

所述Tris、柠檬酸、果糖分别为7.675g、4.1g、5g。

步骤2)中，所述注射器为1mL注射器。