[发明专利]一种硫化铜光热响应局部释放体系及其应用

权利要求书

1.一种硫化铜光热响应局部释放体系，其特征在于：该释放体系为包载有硫化铜的红细胞；在红细胞表面修饰有RGD。

2.权利要求1所述释放体系的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1，采用低渗-重封闭法进行红细胞包载CuS，获得载药红细胞；

步骤2，将RGD修饰在载药红细胞表面，即得。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤1中采用低渗-重封闭法进行红细胞包载CuS的具体过程如下：

a. 纳米硫化铜的制备：以巯基乙酸为表面模板，氯化铜和硫代乙酰胺为反应物，在50℃的条件下保温2小时，合成硫化铜纳米粒子；

b. 低渗：将红细胞重悬于硫化铜溶液中，红细胞与硫化铜溶液按1：1等比例混合，然后置于透析袋中，并置于低渗缓冲液中，4℃条件下放置24小时；

c. 高渗：将透析袋从低渗溶液中转移到重密封高渗缓冲溶液中，在37℃下放置30分钟；

d. 等渗：在PBS缓冲液中洗涤两次以除去未包封的硫化铜，最终获得包载有硫化铜的红细胞。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤b中硫化铜溶液中硫化铜的浓度为5 mg/mL，pH为7.4；步骤b中红细胞与低渗缓冲液的体积比为1：50，低渗缓冲液的组成为：15mM NaH₂PO₄·2H₂O、15mM NaHCO₃、2mM ATP、3mM还原型谷胱甘肽、20mM葡萄糖、5mM NaCl，72mOsm / Kg；步骤c中重封闭高渗缓冲溶液的组成为：250mM NaCl、12.5mM葡萄糖、12.5mM丙酮酸钠、12.5mM肌苷、12.5mM NaH₂PO₄·2H₂O、0.63mM腺嘌呤、550mOsm / Kg。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤2中将RGD修饰在载药红细胞表面的具体过程如下：

a. 制备DSPE-PEG-biotin：将35mg DSPE-PEG-NH₂和7mg NHS-biotin于5mL甲醇中反应2小时，然后用氮气吹干，再在去离子水中用3500 D MWCO的透析袋透析，然后冷冻干燥；

b. 将500μL红细胞重悬于4mL PBS中，并与0.5mg DSPE-PEG-biotin搅拌30分钟。

6.将获得的红细胞-生物素RBC–biotin洗涤两次，重悬于4mL PBS中，连续搅拌加入1mg抗生物素蛋白溶液avidin，4℃反应60分钟，然后将RBC–biotin–avidin洗涤2次除去未结合的avidin；

c. 制备生物素化的RGD：RGD和sulfo-NHS-LC-biotin混合反应；

d. 将RBC–biotin–avidin和生物素化的RGD混合60分钟，PBS洗涤2次，4℃保存，即完成红细胞表面的修饰。

7.权利要求1所述的硫化铜光热响应局部释放体系在制备肿瘤治疗药物中的应用。