[发明专利]一种基因组磁珠提取试剂盒和提取方法

说明书

本发明公开了一种基因组磁珠提取试剂盒，所述试剂盒包括：裂解液、蛋白酶K、异丙醇、羟基磁珠、洗涤液和洗脱液；所述裂解液的配方：25～75mM且pH7.5～8.5的Tris‑HCL，3～5M的异硫氰酸胍，5～15％的聚多卡醇，5～15％的PEG8000；所述洗涤液包括A液和B液，所述A液：120～130mmol/l NaCl，体积浓度80～90％无水乙醇；所述B液：25～35mmol/l Tris，体积浓度80～90％无水乙醇；所述洗脱液的配方：9.5～10.5mM Tris‑HCl；0.8～1.2mM EDTA。该试剂盒提取的核酸浓度更高，核酸琼脂糖凝胶电泳无杂带拖带现象，提取核酸纯度较好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种基因组磁珠提取试剂盒和提取方法。

背景技术

核酸提取的方法包括酚氯仿法、盐析法和柱吸附法等。传统方法提取核酸各有其优缺点，但提取效果欠佳，并且只适用于手工提取，不适用于自动化。磁珠法利用磁珠对核酸的特异性吸附，在磁场的作用下分离并获取核酸，适用于自动化提取。

磁珠具有良好的表面效应和体积效应、良好的选择性磁响应性、物理化学性质稳定等，使珠法核酸提取得到广泛应用。然而不同的磁珠法核酸提取方法，又因其所选用的裂解液、结合液、洗涤液等组分和含量的不同而导致最终核酸提取效率差别很大。另一方面，基于待测样的多样性，包括细胞、细菌、血清、血浆、精液、毛发、睡液、尿液或胸腹水等，不同的待测样采用同一种磁珠法核酸提取方法所得的提取效果和提取效率也存在很大差异。

其中唾液属于较容易获取的核酸是取待测样品，其成分与血清、血浆中的成分存在巨大差异，唾液是无色、无味液体，偏酸性，粘度大。含有淀粉酶、溶菌酶、过氧化物酶、粘蛋自、粘多糖、磷脂等物质。而粘蛋白、粘多糖是使唾液粘稠的主要物质，限制了磁珠法在唾液核酸提取中的应用。

现有的磁珠提取试剂盒存在如下缺点：提取效率低，提取核酸浓度较低，纯度较差的问题。

因此，如何开发一种提取效率高，核酸浓度高，纯度高的磁珠提取试剂盒和提取方法，成为亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明目的是提供一种基因组磁珠提取试剂盒，本发明整个提取过程都在常温下进行，提取出浓度更高，纯度更好的核酸，为后续分子诊断，目的基因检测等提供了便利。

为了实现上述目的，本发明提供了一种基因组磁珠提取试剂盒，所述试剂盒包括：裂解液、蛋白酶K、异丙醇、羟基磁珠、洗涤液和洗脱液；

所述裂解液的配方为：25～75mM且pH7.5～8.5的Tris-HCL，3～5M的异硫氰酸胍，5～ 15％的聚多卡醇，5～15％的PEG8000；

所述洗涤液包括A液和B液，所述A液为：120～130mmol/l NaCl，体积浓度80～90％无水乙醇；所述B液为：25～35mmol/l Tris，体积浓度80～90％无水乙醇；

所述洗脱液的配方为：9.5～10.5mM Tris-HCl；0.8～1.2mM EDTA。

进一步地，所述裂解液的配方为：50mM且pH8.0的Tris-HCL，4M的异硫氰酸胍，10％的聚多卡醇，10％的PEG8000。

进一步地，所述洗涤液包括A液和B液，所述A液为：125mmol/l NaCl，体积浓度85％无水乙醇；所述B液为：30mmol/l Tris，体积浓度85％无水乙醇。

进一步地，所述洗脱液的配方为：10mM Tris-HCl；1mM EDTA。

进一步地，所述蛋白酶K的浓度为20～60mg/ml。

进一步地，所述异丙醇的浓度为200～400ul/ml。

本发明还提供了所述试剂盒提取基因组的方法，所述方法包括：