[发明专利]一种受试物致敏性的检测评价方法

说明书

本发明公开了一种受试物致敏性的检测评价方法，包括以下步骤：步骤一、前期准备；步骤二、离体皮肤组织样本的制备和培养；步骤三、离体皮肤组织样本的微透析采样；步骤四、对采样所得透析液进行组胺检测，评价药物潜在致敏性。本发明采用皮肤微透析与过敏原检测相结合的方法构建体外模型，以离体皮肤组织为样本来进行体外致敏检测，避免了对动物的使用，环保无害，人类离体皮肤试验更加准确，避免了系统性因素的干扰，方便操作，可同时检测若干不同种类致敏物，检测时间短，效果更加灵敏，成本低廉；给临床用药前提供了科学参考，避免可过敏和类过敏反应的发生；可以进行科研取样，也可以实施于临床，进行患有过敏性疾病病人的致敏药物的定性。

技术领域

本发明涉及一种体外检测模型，具体涉及一种受试物致敏性的检测评价方法。

背景技术

过敏反应通常情况下是因药物、药物代谢产物、药物添加剂等的免疫原性引起的，而类过敏反应是因药物刺激或激活炎症介质的释放引起的。药物过敏反应是特异质反应，从临床上往往难于预测其发生，因此，药物临床前致敏性评价对于指导药物临床安全用药至关重要。药物过敏和类过敏反应是主要的不可预测药物的不良反应，可以导致用药者产生皮疹、局部水肿、哮喘等症状，严重的会导致用药者出现休克甚至死亡。

随着国际上动物保护的呼声日益高涨，采用体外方法替代体内动物实验已成为现代研究的趋势。但是过敏反应在临床上是具有明显个体差异性的特异反应，加之免疫系统的作用极为复杂，人与实验动物的免疫系统存在很大不同，因此通过动物实验评价药物过敏易产生假性结果，采用目前建立的体内外致敏评价方法对一些药物进行致敏评价的结果与临床实际结果存在较大的差异。目前建立的致敏性评价体外替代试验方法主要针对化合物的皮肤致敏性。为此，建立科学、全面、有效的致敏性评价方法仍是未来药物临床前安全性评价中的重要工作，合理、准确的评价药物潜在致敏性的体外检测模型的研究对于临床和科研具有重大意义，进行有效的药物临床前致敏性评价能够对药物可能导致的过敏和类过敏反应提供预警，使易感患者在临床用药时避免使用可能发生过敏和类过敏反应的相关药物，或在用药前给予有效干预措施避免过敏和类过敏反应发生。

发明内容

为解决现有技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种受试物致敏性的检测评价方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种受试物致敏性的检测评价方法，包括以下步骤：

步骤一、前期准备

准备收集瓶、微量输液泵、微透析探针、离体皮肤组织等检测用品；

步骤二、离体皮肤组织样本的制备和培养

建立阳性对照和阴性对照，将离体皮肤组织样本分别放入含可疑致敏药物、阳性对照、阴性对照的培养皿中孵育；

步骤三、离体皮肤组织样本的微透析采样

将若干微透析探针固定于离体皮肤组织样本上，微透析探针入口管连接至微量输液泵，微透析探针出口管处放置收集瓶，开始微透析采样；

步骤四、对采样所得透析液进行组胺检测，评价药物潜在致敏性。

进一步的，步骤一中，前期准备的步骤包括：

1）准备若干数量的收集瓶，分别编号并称重；

2）根据需要，调整线性微透析膜的长度至4-6cm，微透析膜的厚度为5-6μm；

3）准备微量输液泵和若干微透析探针，微量输液泵中安装注射器，使用灌注液填充灌注用的注射器，用灌注液冲洗微透析探针，确认通过探针的流量并确保不泄漏，微透析探针入口管连接至注射器，灌注微透析探针。

进一步的，步骤二中，离体皮肤组织样本的制备和培养的步骤包括：