[发明专利]一种受试物致敏性的检测评价方法

权利要求书

1.一种受试物致敏性的检测评价方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、前期准备

准备收集瓶、微量输液泵、微透析探针、离体皮肤组织等检测用品；

步骤二、离体皮肤组织样本的制备和培养

建立阳性对照和阴性对照，将离体皮肤组织样本分别放入含可疑致敏药物、阳性对照、阴性对照的培养皿中孵育；

步骤三、离体皮肤组织样本的微透析采样

将若干微透析探针固定于离体皮肤组织样本上，微透析探针入口管连接至微量输液泵，微透析探针出口管处放置收集瓶，开始微透析采样；

步骤四、对采样所得透析液进行组胺检测，评价药物潜在致敏性。

2.根据权利要求1所述的一种受试物致敏性的检测评价方法，其特征在于，离体皮肤组织样本的制备和培养的具体步骤包括：

1）将离体皮肤组织固定在聚苯乙烯泡沫塑料上，以便对皮肤进行视觉检查和处理；

2）使用解剖刀、手术刀或剪刀从离体皮肤组织中取出合适的皮肤标本，放入培养皿中；

3）无创去除所有粘附的皮下脂肪，清洗，得到离体皮肤组织样本；

4）将离体皮肤组织样本放置在含缓冲液的培养皿中；

5）将若干不同种类的待测药物分别磨成粉末，使用培养基作为稀释缓冲液，对所述若干不同种类的待测药物分别进行等比例稀释，依次稀释并按顺序编号，得到若干不同种类的可疑致敏药物，分别放入培养皿中，随后将离体皮肤组织样本分别放入含可疑致敏药物的培养皿中，于37.0-37.5℃、3-5%CO₂条件下孵育10-15min。

3.根据权利要求1所述的一种受试物致敏性的检测评价方法，其特征在于，步骤二中，将人源IgE抗体使用90-100μL的PBS稀释作为阳性对照，使用浓度为5-7μg/mL的PBS作为阴性对照。

4.根据权利要求1所述的一种受试物致敏性的检测评价方法，其特征在于，步骤三中，离体皮肤组织样本的微透析采样的步骤包括：

1）步骤二所得离体皮肤组织样本上标记微透析探针进入点和退出点；

2）插入若干跨越计划皮内长度的引导插管；

3）在离体皮肤组织样本上进行5%SDS皮内注射或应用0.5%双硫仑乳膏涂抹，然后在37-37.5℃孵育4-4.5h，随后使用蘸有0.9%NaCl的湿纸巾擦拭离体皮肤组织样本上的双硫仑乳膏；

4）冲洗插入离体皮肤组织样本内的引导插管，每个引导插管顶端插入一个微透析探针，运行微量输液泵，透析液从微透析探针出口管流出，轻轻拔出引导插管，使微透析探针留在原位，将微透析探针固定于离体皮肤组织样本上，每两个微透析探针之间的距离适应离体皮肤组织样本中分析物的扩散性；

5）微透析探针出口管处放置收集瓶，开始微透析采样。

5.根据权利要求1所述的一种受试物致敏性的检测评价方法，其特征在于，步骤四中，按照步骤三完成微透析采样后，重新称量收集瓶，将采样所得透析液进行组胺含量检测，若在透析液中检测到组胺，说明可疑致敏药物为致敏药物。