[发明专利]一种检测喹诺酮类药物残留的试剂盒及其检测方法

说明书

本发明涉及食品安全检测技术领域，具体涉及一种检测喹诺酮类药物残留的试剂盒及其检测方法。所述试剂盒包括检测培养基、大肠杆菌冻干菌粉、96微孔板、薄膜贴和对照液。所述试剂盒用于畜禽生肉的喹诺酮类药物残留的检测。本发明提供的检测试剂盒样品的前处理方法简单，大大减少了检测人员的工作量，节省人力物力；检测试剂盒可以检测多种喹诺酮类药物，并显著的提高了检测灵敏度。

技术领域

本发明涉及食品安全检测技术领域，具体涉及一种检测喹诺酮类药物残留的试剂盒及其检测方法。

背景技术

喹诺酮类药物是一种合成抗菌药物，因其抗菌活性强、抗菌谱广、药物动力学特征好，广泛应用于动物疾病防治。但由于对该类药物的滥用，导致其在动物性食品中的残留超标，人们长期食用喹诺酮类药物残留超标的食品，会引起如过敏反应、人体肠道菌群受干扰以及对该类药物产生耐药性等问题，影响人类的健康。喹诺酮类药物残留问题已引起了广泛关注。目前，畜禽肉中检测抗生素残留方法主要有色谱法、免疫分析法、ELISA检测法和微生物检测法等。其中色谱法较为常用，可以进行定性定量检测，检测结果灵敏准确，但设备投入大，人员技能要求高，适合大型综合性实验室进行仲裁判定和确证；免疫分析法虽灵敏度高，但是检测成本昂贵，只能检测单一抗生素，不易于推广；ELISA检测法灵敏度高，只能检测单一抗生素，且操作繁琐，亦不易于推广。

微生物检测法是一种传统经典的测定方法，其利用抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用，与阴性对照进行对比，可以反应出待测样本中是否存在抗生素残留。微生物检测法敏感性强、成本低廉、操作简单，可作为一种抗生素初筛方法应用在农产品安全监管环节。因此，提供一种灵敏度高、快速检测畜禽产品中喹诺酮类药物残留的试剂盒具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种检测喹诺酮类药物残留的试剂盒及其检测方法。

为实现上述目的，本发明采取以下的技术方案：

一种检测喹诺酮类药物残留的试剂盒，所述试剂盒包括检测培养基、大肠杆菌冻干菌粉、96微孔板、薄膜贴和对照液。

进一步地，在上述检测喹诺酮类药物残留的试剂盒中，所述检测培养基组成成分为：葡萄糖4～8g，蛋白胨6～10g，牛肉浸粉3～6g，磷酸氢二钾10～15g，氯化钠3～8g，亮黑100～200mg，甲苯胺蓝10～20mg，氨苄西林0.5～1mg，溴莫普林50～200ug，蒸馏水1000mL；所述培养基的pH为7.4～7.8。

进一步地，在上述检测喹诺酮类药物残留的试剂盒中，检测培养基的制备方法为将检测培养基组成成分完全溶解后，用0.22μm的滤膜过滤，分装到灭菌过的塑料瓶中，4℃保存。

进一步地，在上述检测喹诺酮类药物残留的试剂盒中，所述大肠杆菌冻干菌粉的制备方法为：

步骤1：菌株复苏：在无菌环境下用接种环从甘油管中挑取大肠杆菌种子液划线至营养琼脂平板上，在30～37℃培养14～24h；

步骤2：菌株繁殖：在无菌环境下用接种环从平板上挑取单菌落接种至装有50mL营养肉汤液体培养基的三角瓶中，在30～37℃、150～200rpm/min条件下培养12～20h；

步骤3：活菌计数：采用梯度稀释法用无菌生理盐水逐渐将菌液稀释并取100uL涂布于营养琼脂平板上，在30～37℃培养14～24h，计算活菌数，活菌数为10⁹～5×10⁹cfu/mL；将菌液放于4℃保存；

步骤4：菌株冻干：吸取菌液与10％脱脂乳载体充分混匀，分装到灭菌过的西林瓶中，每瓶2mL，放于-80℃冰箱中冷冻，待菌液完全结冰后放入冷冻干燥机中，低温冷冻干燥。