[发明专利]一种基于适配体的抗生素双检测传感器的建立方法

权利要求书

1.一种基于适配体的抗生素双检测传感器的建立方法，其特征在于：

1)合成以下序列，即氯霉素适配体和卡那霉素适配体：

氯霉素适配体Apt-CAP:

5’-AGCAGCACAGAGGTCAGATGACTTCAGTGAGTTGTCCCACGGTCGGCGAGTCGGTGGTAGCCTATGCGTGCTACCGTGAA-3’

卡那霉素适配体Apt-KANA：

5’-CACCTAATACGACTCACTATAGCGGATCCGTGTCCAAGTGGTCTTGAGGTTCTGGCTCGAACAAGCTTGC-3’

2)双检测体系的建立

.实验所用缓冲溶液

F2缓冲液：三羟甲基氨基甲烷Tris20mM，氯化钠NaCl 200mM，乙二胺四乙酸二钠EDTANa₂ 1mM，曲拉通Triton X-100质量百分比0.02％，pH 7.8；

1×B缓冲液：三羟甲基氨基甲烷Tris 50mM，氯化镁MgCl₂ 1mM，氯化钠NaCl 200mM，氯化钾KCl 5mM,曲拉通Triton X-100质量百分比0.02％，pH 7.4；

2×B缓冲液：三羟甲基氨基甲烷Tris 100mM，氯化镁MgCl₂ 2mM，氯化钠NaCl 400mM，氯化钾KCl 10mM,曲拉通Triton X-100质量比百分0.02％，pH 7.4；

2.1分别取2μL的浓度为1μM的Apt-CAP、Apt-KANA和互补链C-DNA于200μL小管中，加入34μL的F2缓冲液混匀后，于95℃加热处理5min，后置于冰上15min，最后放置于20℃摇床中，150rpm转速条件下震荡1h，制备复合链溶液；

2.2将PuriMag链霉亲和素的磁珠在Vortex旋涡混合器上涡旋混匀20s，取75μL磁珠于离心管中，放磁分离架上分离磁珠，去除上清；加入F2缓冲液吹打混匀，后再次磁分离移去上清，重复操作清洗3遍；最后以F2缓冲液重悬，备用；

2.3将步骤2.1中复合链溶液加入到上步骤中的磁珠悬液中，并加入F2缓冲液至最终孵育体系为625μL；将其置于20℃摇床中，150rpm条件下震荡1h；后置于4℃冰箱过夜；

2.4将上步骤中离心管置于磁分离架上，去除上清；加入1×B缓冲液吹打混匀，后再次进行磁分离，去除上清，重复操作清洗3遍；后加入2×B缓冲液重悬。