[发明专利]一种利用共固定双酶催化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法

权利要求书

1.一种利用共固定双酶催化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将β-葡萄糖苷酶、磷酸盐缓冲溶液、Fe₃O₄溶液、氯化铜溶液、木糖苷酶进行反应，得到共固定双酶；

2)用共固定双酶和黄芪甲苷进行催化反应，得到环黄芪醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述β-葡萄糖苷酶的浓度为0.5～2.5mg/mL；所述磷酸盐缓冲溶液为磷酸氢二钠和柠檬酸混合液，pH值为7.0～8.0；Fe₃O₄溶液的浓度为3～8mg/mL；氯化铜溶液的浓度为150～250mM；木糖苷酶的浓度为0.5～2.5mg/mL。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述β-葡萄糖苷酶、磷酸盐缓冲溶液、Fe₃O₄溶液、氯化铜溶液和木糖苷酶的体积比为4～8：60～180：8～12：8～12：4～8，所述反应的时间为20～50h。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤1)所述的反应为β-葡萄糖苷酶、部分磷酸盐缓冲溶液、Fe₃O₄溶液和氯化铜反应，得到磁性纳米粒子固定β-葡萄糖苷酶；

磁性纳米粒子固定β-葡萄糖苷酶与木糖苷酶、剩余的磷酸盐缓冲溶液反应，得到共固定双酶；

所述部分磷酸盐缓冲溶液和剩余的磷酸盐缓冲溶液的体积比为7～8:9～10。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤1)所述的反应为β-葡萄糖苷酶、木糖苷酶、磷酸盐缓冲溶液和Fe₃O₄溶液反应后再与氯化铜溶液反应。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，步骤2)所述的进行催化反应的共固定双酶为沉淀物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2)所述催化反应在磷酸盐缓冲溶液中进行，所述催化反应的温度为20～40℃，时间为36～60h，pH值为7.0～8.0。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤2)所述黄芪甲苷在磷酸盐缓冲溶液中的浓度为1～3mg/mL，共固定双酶在磷酸盐缓冲溶液中的浓度为50～200μg/mL。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液为磷酸氢二钠和柠檬酸混合液。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤2)所述催化反应结束后，对得到的产物混合物进行洗脱，所述洗脱用的洗脱剂为氯仿、甲醇和水的混合物。