[发明专利]一种湖羊精液常温保存最适温度的筛选方法

说明书

本发明提供的一种湖羊精液常温保存最适温度的筛选方法，本发明设置三个温度（15℃、20℃和25℃）对湖羊精液进行常温保存，对精液保存期间的活率、活力、死亡率、存活时间、运动性能以及活性氧水平等指标进行检测，通过本发明，可筛选得到15℃为湖羊精液常温保存的最适温度，在精液保存期间，精液品质变化平稳，有效存活时间可以达到5.67天，总存活时间可以达到18.73天。本发明旨在客观的评价并筛选出一种湖羊精液常温保存的最适温度，以期为湖羊精液保存技术在生产实践中提供参考依据。

技术领域

本发明涉及一种湖羊精液常温保存最适温度的筛选方法，属于绵羊繁殖技术领域。

背景技术

湖羊属于脊索动物亚门哺乳纲偶蹄目牛科，是我国一级保护地方畜禽品种。湖羊因为其高繁殖力、优良的泌乳性能和花案美观的羔皮而著称，深受消费者青睐，养殖规模逐渐扩大。

为提高湖羊的繁殖效率，充分利用优良种公畜的精液，实际生产中已将人工授精技术应用于湖羊的配种中。精液的保存是人工受精技术的核心环节，其主要分为常温保存、低温保存和超低温冷冻保存。在实际生产中受技术条件等的影响，常温保存被广泛应用。15℃～25℃均属于常温保存的范围，但湖羊精液常温保存的最适温度没有统一的标准。

为此，有必要设置不同的保存温度对湖羊精液进行常温保存，通过分析不同常温保存温度下湖羊精子活率、活力、存活时间、运动性能以及活性氧水平等的变化情况，确定湖羊精液常温保存的最适温度，以期为湖羊精液保存技术在生产实践中提供参考依据，降低精液保存成本，满足生产实践需要。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有问题，提供一种湖羊精液常温保存最适温度的筛选方法，用于解决现有技术中，湖羊精液常温保存时间短，精液品质变化较快的问题，延长精液的存活时间。

本发明的目的是这样实现的，一种湖羊精液常温保存最适温度的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)、配制湖羊精液常温保存稀释液，所述配方由15.30～15.40gTris、7.7～8.7g柠檬酸、9.5～10.5g果糖、0.1～0.2g青霉素钠、0.3～0.4g链霉素硫酸盐溶解于500mL超纯水中构成；首先将15.30～15.40gTris、7.7～8.7g柠檬酸、9.5～10.5g果糖充分溶解于500mL超纯水中，然后使用0.22μm滤膜过滤除菌，在4℃冰箱保存，最后添加0.1～0.2g青霉素钠、0.3～0.4g链霉素硫酸盐，得到湖羊精液常温保存稀释液；

步骤2)、采集精液，混合采集到的精液消，消除个体差异，然后将精液稀释10倍；将130μl的精液加入1.5ml的离心管中，沿着离心管管壁缓慢加入37℃预热的稀释液，用棉花包裹3～4层，放置在15℃、20℃、25℃不同温度下进行保存，每隔8小时轻轻摇晃保存精液的离心管，防止精子沉降；

步骤3)、湖羊精液在15℃、20℃和25℃不同温度的保存过程中，采用精子自动分析仪以及试剂盒对不同保存温度条件下的湖羊精液保存期间的活率、活力、死亡率、存活时间、运动性能以及活性氧含量各项指标进行检测，完成湖羊精液常温保存最适温度的筛选。

所述Tris、柠檬酸、果糖、青霉素钠、链霉素硫酸盐分别为15.35g、8.25g、10g、0.1559g、0.3472g。

步骤3)中，湖羊精液常温保存最适温度的筛选后，湖羊精液常温保存的最适温度为15℃。