[发明专利]一种粘蛋白1及其唾液酸糖基的双重荧光成像方法及应用

权利要求书

1.用于粘蛋白1及其唾液酸糖基双重荧光成像的纳米探针组合物，其特征在于，包括唾液酸-金纳米星探针和粘蛋白1-量子点探针；

所述唾液酸-金纳米星探针是在金纳米星表面通过二硫键固定第一DNA以及聚乙二醇，再将短互补单链的第二DNA与唾液酸适配体碱基互补配对，再与巯基修饰的PEG偶联制得；所述第一DNA通过碱基互补配对连有近红外染料Cy5标记的唾液酸适配体；所述唾液酸适配体可特异性识别粘蛋白1上的唾液酸；所述第一DNA和第二DNA是与Sia 适配体互补的单链核酸；所述第一DNA的核苷酸序列为如SEQ ID NO.1所示；所述第二DNA的核苷酸序列如SEQID NO.2所示；所述Sia适配体具有如下结构：5’-Cy5-GACGCUGGGCCUAGUCCGUGACUAUAUCGAUUGCCUUUUCAGACUUGCGUC-3’；

所述粘蛋白1-量子点探针是由量子点依次与MUC1适配体、NH₂-PEG偶联合成，使量子点表面通过酰胺键固定有可与MUC1蛋白骨架发生特异性识别的MUC1适配体和聚乙二醇；所述MUC1适配体具有如下结构：5’-NH₂-C₆-GCAGTTGATCCTTTGGATACCCTGG-3’。

2.根据权利要求1所述的纳米探针组合物，其特征在于，所述唾液酸-金纳米星探针按如下方法制备：

（1）采用晶种生长法合成金纳米星GNSs；

（2）将步骤（1）合成的GNSs和巯基修饰的第一DNA偶联形成GNS-2；

（3）将步骤（2）制备的GNS-2与Cy5标记的Sia适配体通过碱基互补配对原则生成GNS-3；

（4）将步骤（3）制备的GNS-3与第二DNA偶联形成GNS-4；

（5）将步骤（4）制备的GNS-4与巯基修饰的PEG偶联得到唾液酸-金纳米星探针。

3.根据权利要求1所述的纳米探针组合物，其特征在于，所述粘蛋白1-量子点探针按如下方法制备：

（1）将CdSe@ZnS QDs和氨基修饰的MUC1适配体在EDC和NHS存在下进行偶联形成QD-2；

（2）将步骤（1）制备的QD-2与氨基修饰的PEG在含EDC和NHS的环境中偶联，得到量子点探针MUC1-QDs探针。

4.含有权利要求1~3任一所述纳米探针组合物的肿瘤筛查试剂盒。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述肿瘤选自：肺癌、肝癌、胃癌、食道癌、肠癌、鼻咽癌、乳腺癌、淋巴癌、肾癌、胰腺癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫癌、骨癌、胆囊癌、唇癌、黑色素瘤、舌癌、喉癌、白血病、前列腺癌、脑癌、鳞癌、皮肤癌、血管瘤、脂肪瘤、甲状腺癌肺癌、神经胶质瘤、宫颈癌。

6.权利要求1或2所述的纳米探针组合物在制备检测MUC1及其Sia糖基的产品中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述产品包括检测试剂盒。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述检测试剂盒用于体外检测。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述检测试剂盒用于体内检测。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述检测试剂盒用于临床组织样本检测。

11.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述检测是将待测的肿瘤组织切片在含有所述纳米探针组合物的环境中共孵育，然后用NIR照射2min，照射条件为980 nm，5 mW/cm²，再用激光共聚焦对QDs和FRET诱导的Cy5进行荧光成像，以分别反映MUC1蛋白骨架及其唾液酸的水平。