[发明专利]一类具有抗急性淋巴细胞白血病活性的NPM1结合蛋白偶联阿霉素胶束及其制备方法

说明书

本发明公开一类具有抗急性淋巴细胞白血病活性的NPM1结合蛋白偶联阿霉素胶束及其制备方法；是合成胶束（聚乙二醇对甲苯磺酸酯‑聚乳酸PLA‑PEG‑OTs）；制备阿霉素胶束（ADR‑PMs）；制备NPM1结合蛋白偶联阿霉素胶束（ADR‑PMs‑NPMBP）。该NPM1结合蛋白偶联阿霉素胶束的体外癌细胞抑制试验表明，对急性淋巴细胞白血病细胞具有良好的抑制活性，有望被开发为临床抗白血病药物，具有较大的应用前景。

技术领域

本发明具体涉及一种具有抗急性淋巴细胞白血病活性的NPM1结合蛋白偶联阿霉素胶束的制备方法。

背景技术

纳米载药系统，可增强药物的肿瘤靶向输送效率。NPM1结合蛋白可特异靶向NPM1蛋白，而NPM1蛋白在难治复发ALL病人中高表达，并与耐药相关。将NPM1结合蛋白与常用化疗药物阿霉素通过纳米载药系统偶联，可望产生较好的靶向性和抗癌活性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抗急性淋巴细胞白血病活性的NPM1结合蛋白偶联阿霉素胶束及其制备方法，通过合成聚合胶束，丙酮溶剂蒸发法合成阿霉素胶束，并将NPM1结合蛋白偶联至胶束，制成NPM1结合蛋白纳米载药胶束。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

1）合成胶束（聚乙二醇对甲苯磺酸酯-聚乳酸 PLA-PEG-OTs）；2）制备阿霉素胶束（Adriamycin-Polymeric micelles，ADR-PMs）；3）制备NPM1结合蛋白偶联阿霉素胶束（Adriamycin-Polymeric micelles-Nucleophosmin-binding protein，ADR-PMs-NPMBP）。

其具体包括以下步骤：

1）胶束（聚乙二醇对甲苯磺酸酯-聚乳酸 PLA-PEG-OTs）的合成

首先合成一端含有对甲苯磺酸酯基团（-OTs）的PEG（HO-PEG-OTs）作为大分子引发剂，加入二氯甲烷（Dichloromethane，DCM），并加入三乙胺，使PEG 完全溶解；称取TsCl及DMAP，使用DCM 溶解后，缓慢滴加到含PEG的DCM 溶液中；采用开环聚合法合成PLA-PEG-OTs；

2）阿霉素胶束（ADR-PMs）的制备

称取步骤1）制得的聚合物PLA-PEG-OTs 20 mg，加入浓度为2 mg/mL阿霉素的丙酮溶液2 mL，于磁力搅拌器上避光搅拌；待聚合物溶解完全后，缓慢滴加去离子水2 mL，搅拌均匀以后，35℃避光减压旋蒸1 h除去有机溶剂，得到澄清的阿霉素胶束溶液（ADR-PMs），最后使用0.22 μm的滤膜无菌过滤备用。

3）NPM1结合蛋白偶联阿霉素胶束（ADR-PMs-NPMBP）的制备

取步骤2）制得的ADR-PMs溶液，加入适量无菌过滤的pH = 7.4的PBS缓冲溶液，再加入NPMBP，总体积为500 μL。混合均匀后，得到纳米载药胶束溶液（ADR-PMs-NPMBP）。