[发明专利]一种骨肉瘤类器官的培养方法及其骨肿瘤培养基

说明书

本发明公开了一种骨肉瘤类器官的培养方法及其骨肿瘤培养基，本发明使用了2种培养方法，骨肉瘤类器官3D培养模型的制备方法和骨肉瘤类器官的气液培养模型的制备方法。本发明的一种骨肉瘤类器官3D培养模型的制备方法，包括如下步骤：(1)组织清洗:用含1xPen‑Strep Glutamine ADMEM/F12 10ml清洗2‑5遍；(2)将组织切成1mm³大小后，用消化液消化30‑60分钟，消化后4℃，1200r离心5min；(3)用含1x Pen‑Strep Glutamine ADMEM/F12 10ml清洗3遍；(4)100uM细胞筛过滤后计数离心，Collagen加1‑100ug/ml laminin中重悬后铺板；(5)培养期间每3‑4天更换一次骨肿瘤培养基；(6)类器官一般每15‑20天传代1次，传代时每孔加入2‑5倍量的TrpLE Express。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种骨肉瘤类器官的培养方法及其骨肿瘤培养基。

背景技术

骨肿瘤是发生于骨骼或其附属组织的肿瘤。有良性，恶性之分，良性骨肿瘤易根治，预后良好，恶性骨肿瘤发展迅速，预后不佳，死亡率高。恶性骨肿瘤分为原发性和继发性。从体内其他组织或器官的恶性肿瘤经血液循环、淋巴系统转移至骨骼为继发性恶性骨肿瘤。还有一类病损称瘤样病变，肿瘤样病变的组织不具有肿瘤细胞形态的特点，但其生态和行为都具有肿瘤的破坏性，一般较局限，易根治。

骨肉瘤的产生和发展的真正原因尚不清楚，可能是由一种或几种负责生成新骨的细胞引起的。骨肉瘤常诊断为10-30岁的儿童和青少年，除手术切除外，不能手术的骨肉瘤患者通常接受放化疗，US1患者的5年相对生存率约为60％。骨肉瘤患者的具体治疗选择与骨肉瘤的起源、肿瘤的大小、诊断的骨肉瘤的类型和分级以及骨肉瘤是否发生转移密切相关。骨肉瘤通常伴有预后不良，而目前用于治疗骨肉瘤的化疗药物大多令人失望。而肿瘤体外培养临床前化疗药物的筛选为癌症患者提供了方便快捷的精准用药指导方法。

目前，缺乏一种骨肉瘤类器官的培养方法及其骨肿瘤培养基。

发明内容

本发明提供了一种骨肉瘤类器官的培养方法及其骨肿瘤培养基。

为了解决现有技术的问题，本发明提供了如下技术方案：本发明的一种骨肉瘤类器官3D培养模型的制备方法，包括如下步骤：

(1)组织清洗:用含1xPen-Strep Glutamine ADMEM/F1210ml清洗2-5遍，加入2-5倍量；

(2)将组织切成1mm³大小后，用消化液消化30-60分钟，消化后4℃，1200r离心5min；

(3)用含1x Pen-Strep Glutamine ADMEM/F1210ml清洗3遍；

(4)100uM细胞筛过滤后计数离心，Collagen加1-100ug/ml laminin中重悬后铺板；

(5)培养期间每3-4天更换一次骨肿瘤培养基；

(6)类器官一般每15-20天传代1次，传代时每孔加入2-5倍量的TrpLE Express。

进一步地，在步骤(2)中，所述的消化液包括如下组分组成：

进一步地，在步骤(4)中，铺板24孔板每孔50ul Collagen含1000个细胞/细胞团，37℃凝固10分钟，加培养基500ul/孔。

更进一步地，在步骤(6)中，在37℃时消化5-10分钟，加1/10体积FBS终止消化，室温600g离心5分钟，Collagen中重悬24孔板每孔50ul Collagen含1000个细胞/细胞团，37℃凝固10分钟，加骨肿瘤培养基500ul/孔。