[发明专利]神经元胞质蛋白基因产物9.5抗体胶体金检测试剂及其制备方法

说明书

本发明公开了神经元胞质蛋白基因产物9.5抗体胶体金检测试剂及其制备方法，属于体外诊断技术领域，试剂由包被膜、吸水纸、涂覆金标抗体的玻璃纤维膜依次粘贴构成；所述包被膜通过下述方法制备：稀释PGP9.5抗原至浓度为5～20μg/mL，喷涂或涂覆在包被膜上，晾干后封闭、烘干、封袋备用；所述金标抗体通过下述方法制备：按9～11μg/mL胶体金加入PGP9.5抗体，混匀后静置，离心处理，弃去上清，将沉淀洗涤、溶解备用。本发明解决了目前测定PGP9.5蛋白抗体测定样本的时间长，操作费时费力的技术问题，操作方便快捷，无需大型仪器及耗材，节约设备和人力成本，做到现场检测，抗干扰能力强，可以对患者的健康状况作出判断及监测。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，尤其涉及一种借助胶体金标记显色的 免疫检测神经元胞质蛋白基因产物9.5抗体检测试剂及其制备方法。

背景技术

肺癌是当今世界上最常见的恶性肿瘤之一。在肿瘤发病早期，机体的 免疫系统可识别肿瘤细胞内表达异常的蛋白，即肿瘤相关抗原(TAAs)。 TAAs的过表达、突变、错误折叠、异常退化等改变可导致癌症患者产生自 身反应性免疫应答，并产生针对这些抗原的自身抗体，少量TAAs刺激即 可引起B细胞产生大量的自身抗体。因此，检测TAAs的自身抗体可作为 肺癌早期诊断的分子标记物。

目前针对肺癌的筛查，主要为联合胸部低剂量计算机断层扫描 (low-dosecomputed tomography，LDCT)技术、血液分子标志物的检测、 痰细胞学检测、纤维支气管镜等多种检测手段，但对早期肺癌的诊断效果 欠佳。

神经元胞质蛋白基因产物9.5(PGP9.5)其表达不依赖于神经的分化而 独立存在，与肿瘤的病理分期密切相关，在原发性肺癌中有大量表达。 PGP9.5是一种神经特异性肽，是泛素水解酶，广泛表达于神经元分化的各 个阶段，细胞蛋白泛素化并通过泛素介导的蛋白水解酶将其靶向降解是调 控细胞周期基因的重要机制。在肿瘤中，PGP9.5增加细胞周期蛋白的去泛 素化可能导致体细胞的不可控生长。

目前测定PGP9.5蛋白抗体的方法是酶联免疫法，酶联免疫法测定样本 的时间长，操作费时费力，虽然可以做到定量测定，但无法做到POCT试 剂的现场检测，互不干扰。因此，急需一种方便、快捷的PGP9.5蛋白抗体 检测试剂，做到现场检测，对患者的健康状况作出判断及监测。

发明内容

本发明针对目前测定PGP9.5蛋白抗体测定样本的时间长，操作费时费 力的技术问题，提供一种适胶体金层析法检测PGP9.5抗体的试剂，做到现 场检测，无需大型仪器及耗材，抗干扰能力强，可以对患者的健康状况作 出判断及监测。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明首先提供了神经元胞质蛋白基因产物9.5抗体胶体金检测试剂， 由包被膜、吸水纸、涂覆金标抗体的玻璃纤维膜依次粘贴构成；

所述包被膜通过下述方法制备：稀释PGP9.5抗原至浓度为5～20μg/mL， 喷涂或涂覆在包被膜上，晾干后封闭、烘干、封袋备用；

所述金标抗体通过下述方法制备：按9～11μg/mL胶体金加入PGP9.5 抗体，混匀后静置，离心处理，弃去上清，将沉淀洗涤、溶解备用。

优选地，所述PGP9.5抗原为纯化的PGP9.5基因工程重组抗原、或合 成多肽、或亲和纯化抗原。

优选地，所述PGP9.5抗原的纯度≥95％。

优选地，所述PGP9.5抗原稀释至浓度为8μg/mL，喷涂或涂覆在包被 膜上。

优选地，所述金标抗体按10μg/mL胶体金加入PGP9.5抗体中。

优选地，所述涂覆金标抗体的玻璃纤维膜通过下述方法得到：将制备 好的金标抗体均匀地铺在玻璃纤维膜上，每毫升溶液铺4～8平方厘米，冷 冻干燥，封袋，置4℃备用。