[发明专利]一种在基因芯片上形成交联倒置探针的方法

权利要求书

1.一种借助于跨链交叉连接在基因芯片上形成交联倒置探针的方法，所述方法包括以下步骤：

a)在所述基因芯片上的探针的5’端最后一个碱基之后合成U碱基，得到U-芯片探针，

b)任选地，进行洗涤，

c)使合成探针与所述U-芯片探针杂交，所述合成探针从5’端到3’端依次包含至少与所述U-芯片探针上的U碱基下游的邻接序列反向互补的序列、U碱基和突出序列，其中所述U-芯片探针和所述合成探针中的U碱基恰好形成U碱基对，

d)任选地，进行洗涤，

e)加入UDG酶，以切除所述U-芯片探针和所述合成探针中的U碱基，从而产生空碱基对，

f)任选地，进行洗涤，

g)加入用于跨链交叉连接的交联剂，以使所述空碱基对交联，

h)任选地，进行洗涤，以除去未与所述U-芯片探针交联在一起的合成探针，

从而在所述基因芯片上形成所述交联倒置探针。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述用于跨链交叉连接的交联剂选自aoNao、二胺类。

3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述步骤c)在所述步骤e)之前或之后进行。

4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述步骤c)和所述步骤g)同时进行。

5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述步骤g)在室温或37℃下进行。

6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述步骤g)进行2小时至过夜、4小时至过夜、6小时至过夜、8小时至过夜、6小时、8小时或过夜。

7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述反向互补序列的长度为5-30个碱基、10-25个碱基或15-25个碱基。

8.通过前述权利要求中任一项所述的方法获得的带有交联倒置探针的基因芯片。

9.一种带有交联倒置探针的基因芯片，其中直接固定在所述基因芯片上的芯片探针与并未直接固定在所述基因芯片上的合成探针在一对碱基位点处具有跨链交叉连接点，所述跨链交叉连接点是所述基因芯片上的芯片探针的5’方向终点，所述合成探针中位于所述跨链交叉连接点上游5’方向的序列与所述基因芯片上的芯片探针中紧邻所述跨链交叉连接点下游3’方向的序列反向互补。

10.如权利要求9所述的带有交联倒置探针的基因芯片，其中反向互补序列的长度为5-30个碱基、10-25个碱基或15-25个碱基。

11.跨链交叉连接用于在基因芯片上形成交联倒置探针的用途。