[发明专利]检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物对、探针、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种检测新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的引物对、探针、试剂盒，所述试剂盒包含上游引物SEQ ID NO.1和下游引物SEQ ID NO.3，或上游引物SEQ ID NO.2和下游引物SEQ ID NO.4。本发明检测新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的试剂盒，以RPA方法对SARS‑CoV‑2病毒进行核酸检测，灵敏度可达250copies/mL，检测准确性100％，并能在30min内完成对新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的检测，非常适用于现场快速筛查，具有非常好的应用前景。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，特别涉及检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物对、探 针、试剂盒及其应用。

背景技术

冠状病毒属(Coronavirus)病毒是具外套膜(envelope)的单股正链RNA病毒，直径约 80～120nm，其遗传物质是所有RNA病毒中最大的，是许多家畜、宠物包括人类疾病的重要 病原，可引起多种急慢性疾病。第九次国际病毒学分类委员会报告将冠状病毒科分为三个属， 即α、β和γ属。其中α属冠状病毒的人冠状病毒229E、人冠状病毒NL63以及β属冠状病毒的人冠状病毒HKU1、人冠状病毒OC43、严重急性呼吸综合征(severe acute respiratorysyndromes，SARS)相关病毒等5种病毒可引起人不同程度疾病。

核酸检测是现阶段用于确诊新型冠状病毒肺炎的主要手段之一。目前对新型冠状病毒的 核酸检测手段主要是RT-PCR法，此方法以其较高的特异性及敏感性在新型冠状病毒检测方 面发挥着重大作用。但是RT-PCR方法由于其变温的特点需要相关的昂贵复杂仪器设备，且 需要有专业的实验室和技术人员，因此无法应用于基层和现场的检测。而且，RT-PCR方法根 据不同的试剂盒，整个检测时间需要1.5-3小时，受检测速度的限制，会导致大量疑似病例的 样本积压，不能快速得到结果。

发明内容

本发明要解决目前缺乏快速、准确检测SARS-CoV-2试剂盒的技术问题，提供一种基于 RPA技术检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物对、探针、试剂盒，该试剂盒操作简单、耗 时短，能快速、准确、特异地对SARS-CoV-2进行检测。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现:

在本发明的一个方面，提供了一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物对，所述 引物对选自：上游引物SEQ ID NO.1和下游引物SEQ ID NO.3，或上游引物SEQ IDNO.2和 下游引物SEQ ID NO.4。

在本发明的另一方面，还提供了一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的探针，所述 探针为SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。

优选的，所述探针在其核苷酸序列的第29位碱基修饰荧光报告基团、第31位碱基替换 为四氢呋喃残基和第33位碱基修饰荧光淬灭基团的物质。

所述荧光报告基团包括FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5；所述荧光淬 灭基团包括TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3或DABCYL。

在本发明的另一方面，还提供了一种检测新型冠状病毒的SARS-CoV-2的试剂盒，所述 试剂盒包含上述的引物对。

优选的，所述试剂盒包含上游引物SEQ ID NO.1、下游引物SEQ ID NO.3、和探针SEQ ID NO.5。

优选的，所述试剂盒包含上游引物SEQ ID NO.2、下游引物SEQ ID NO.4、和探针SEQ ID NO.6。

所述引物的浓度为0.4-1μM，所述探针的浓度为0.2-0.6μM。优选的，所述引物的浓度为 0.6μM，所述探针的浓度为0.4μM。