[发明专利]检测游离棉酚的双信号胶体金免疫层析试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明公开检测游离棉酚的双信号胶体金免疫层析试纸条及其制备方法和应用。本发明首先公开了检测游离棉酚的双信号胶体金免疫层析试纸条包括PVC背衬及设置在PVC背衬上的依次搭接的样品垫、结合垫、反应垫和吸水垫；所述结合垫上含有胶体金标记的可识别游离棉酚的单克隆抗体，所述反应垫上依次设置相互平行的分别包被不同浓度的游离棉酚半抗原与载体蛋白偶联物的检测线T₁线和检测线T₂线及包被羊抗鼠IgG的控制线C线。本发明进一步公开了上述双信号胶体金免疫层析试纸条的制备方法和应用。本发明双信号胶体金免疫层析试纸条能实现游离棉酚的定量检测，速度快，便携，适合现场检测，操作简便，不需要专业技术人员。

技术领域

本发明涉及棉酚的检测领域。更具体地，涉及检测游离棉酚的双信号胶体金免疫层析试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

棉籽饼粕是一种营养丰富的蛋白质原料，一直作为蛋白质饲料用于畜牧养殖业中，可在一定程度上代替豆粕等常规蛋白质原料，弥补蛋白质饲料资源法的不足。但是有毒物质棉酚的存在限制了棉籽饼粕的大量使用。棉酚(gossypol)，又称棉花毒素，是一种黄色多羟基双萘醛化合物，主要分布在锦葵科植物树棉、草棉或陆地棉根皮、成熟种子、茎秆中色素腺体中。棉酚可分为左旋棉酚[(-)-棉酚]和右旋棉酚[(+)-棉酚]2种光学异构体。(+)-棉酚几乎无活性，而(-)-棉酚表现出更强的药用活性，如抗生育、抗肿瘤、抗病毒和抗菌作用。当棉酚被畜禽大量摄入时，其中含有的游离棉酚会使畜禽出现食欲减退，呼吸困难，受精率下降等症状，并通过食物链的作用，蓄积在肉、蛋、奶等食物中，间接威胁人类健康。

关于测定游离棉酚的方法，目前有纸层析法、薄层层析法、比色法、气相色谱法和近红外方法等。这些方法可进行定量分析并具有较低的检测限，但是通常需要昂贵的仪器和复杂的操作，前处理及检测时间长，远不能适应于棉籽蛋白工业化生产中棉酚的快速准确的检测，严重制约了棉籽蛋白在饲料工业上的利用。

因此，需要提供一种低成本、高通量、高灵敏，且适用于大量样品的快速筛查的检测游离棉酚的方法。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种检测游离棉酚的双信号胶体金免疫层析试纸条及其制备方法，以实现对游离棉酚的快速、高通量检测。

本发明的第二个目的在于提供上述双信号胶体金免疫层析试纸条在检测待测样品中游离棉酚的应用。

为达到第一个目的，本发明采用下述技术方案：

本发明首先提供一种检测游离棉酚的双信号胶体金免疫层析试纸条，包括PVC背衬及设置在PVC背衬上的依次搭接的样品垫、结合垫、反应垫和吸水垫；所述结合垫上含有胶体金标记的可识别游离棉酚的单克隆抗体，所述反应垫上从靠近所述结合垫端到靠近所述吸水垫端依次设置相互平行的检测线T₁线、检测线T₂线和控制线C线，所述检测线T₁线和检测线T₂线分别包被不同浓度的游离棉酚半抗原与载体蛋白偶联物，所述控制线C线包被羊抗鼠IgG。

进一步，所述可识别游离棉酚的单克隆抗体是由保藏编号为CGMCC No.19682的单克隆细胞株AAB1分泌产生。

进一步，所述游离棉酚半抗原为半游离棉酚，其分子结构式如式I所示：

进一步，所述载体蛋白为牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)或钥孔血蓝蛋白(KLH)，优选的为牛血清白蛋白(BSA)。

进一步，所述游离棉酚半抗原与载体蛋白的偶联比为1:5-1:20，优选的为1:10。