[发明专利]检测游离棉酚的双信号胶体金免疫层析试纸条及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测游离棉酚的双信号胶体金免疫层析试纸条，包括PVC背衬及设置在PVC背衬上的依次搭接的样品垫、结合垫、反应垫和吸水垫；其特征在于，所述结合垫上含有胶体金标记的可识别游离棉酚的单克隆抗体，所述反应垫上从靠近所述结合垫端到靠近所述吸水垫端依次设置相互平行的检测线T₁线、检测线T₂线和控制线C线，所述检测线T₁线和检测线T₂线分别包被不同浓度的游离棉酚半抗原与载体蛋白偶联物，所述控制线C线包被羊抗鼠IgG；

所述可识别游离棉酚的单克隆抗体是由保藏编号为CGMCC No.19682的单克隆细胞株AAB1分泌产生；

所述游离棉酚半抗原与载体蛋白的偶联比为1:5-1:20；

所述游离棉酚半抗原为半游离棉酚，其分子结构式如式I所示：

2.根据权利要求1所述的双信号胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清白蛋白或钥孔血蓝蛋白。

3.根据权利要求1所述的双信号胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述检测线T₁线包被的游离棉酚半抗原与载体蛋白偶联物的浓度为0.75mg/mL，游离棉酚半抗原与载体蛋白偶联物的包被量为0.5-1μL/cm；所述检测线T₂线包被的游离棉酚半抗原与载体蛋白偶联物的浓度为0.25mg/mL，游离棉酚半抗原与载体蛋白偶联物的包被量为0.5-1μL/cm。

4.根据权利要求1所述的双信号胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述控制线C线包被的羊抗鼠IgG的浓度为0.15mg/mL，羊抗鼠IgG的包被量为0.5-1μL/cm。

5.检测游离棉酚的双信号胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

结合垫的制备：将胶体金标记的可识别游离棉酚溶液涂抹到玻璃纤维上，干燥，得到结合垫；

反应垫的制备：将不同浓度的游离棉酚半抗原与载体蛋白偶联物分别包被在硝酸纤维素膜上形成检测线T₁线和检测线T₂线，将羊抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜上作为控制线C线，干燥，得到反应垫；

检测游离棉酚的双信号胶体金免疫层析试纸条的组装：将样品垫、结合垫、反应垫、吸水垫由一端依次黏附在PVC背衬上，得到检测游离棉酚的双信号胶体金免疫层析试纸条。

6.权利要求1-4任一所述的双信号胶体金免疫层析试纸条在检测待测样品中游离棉酚的浓度的应用。