[发明专利]表达目的蛋白分布于丝素和丝胶的家蚕丝心蛋白重链表达系统及制备方法和应用在审
| 申请号： | 202010691454.3 | 申请日： | 2020-07-17 |
| 公开（公告）号： | CN111793643A | 公开（公告）日： | 2020-10-20 |
| 发明（设计）人： | 赵爱春;郝占章;龙定沛 | 申请（专利权）人： | 重庆西蚕生物技术研究院有限公司;西南大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;A01K67/04 |
| 代理公司： | 重庆航图知识产权代理事务所(普通合伙) 50247 | 代理人： | 王贵君 |
| 地址： | 401329 重庆市九*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达 目的 蛋白 分布 丝素 丝胶 家蚕 系统 制备 方法 应用 | ||
1.表达目的蛋白分布于丝素和丝胶的家蚕丝心蛋白重链表达系统，其特征在于：所述家蚕丝心蛋白重链表达系统含有目的基因表达框，所述表达框的5’端为丝心蛋白重链启动子3 Fib-H P3；3’端为重链基因poly(A)序列；所述丝心蛋白重链启动子3 Fib-H P3的核苷酸如SEQ ID NO.1所示；所述链基因poly(A)序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.含有权利要求1所述家蚕丝心蛋白重链表达系统的重组载体。
3.根据权利要求2所述的重组载体，其特征在于：所述家蚕丝心蛋白重链表达系统由含有目的基因表达框通过BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点连入pSLfa1180fa载体而得。
4.根据权利要求2所述的重组载体，其特征在于：所述家蚕丝心蛋白重链表达系统由含有目的基因表达框连入pBac[3×P3DsRedaf]载体Asc Ⅰ和Fse Ⅰ酶切位点而得。
5.权利要求3所述重组载体的制备方法，其特征在于：所述重组载体由含有目的基因表达框通过BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点连入pSLfa1180fa载体而得。
6.根据权利要求5所述重组载体的制备方法，其特征在于，制备方法如下：先将重链基因poly(A)序列通过BamHI和SalI酶切位点连入pSLfa1180fa载体获得pSL-poly(A)质粒，再将目的基因通过XbaI和BamHI连入pSL-poly(A)质粒获得含目的基因的过渡载体，最后将丝心蛋白重链启动子3Fib-H P3通过BamHI和HindⅢ连入含目的基因的过渡载体获得家蚕丝心蛋白重链表达系统pSL-poly(A)-目的基因-Fib-H P3。
7.根据权利要求6所述重组载体的制备方法，其特征在于：所述丝心蛋白重链启动子3由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4为引物，含有家蚕品种p50丝素基因的细菌人造染色体克隆为模板经PCR扩增而得。
8.根据权利要求6所述重组载体的制备方法，其特征在于：所述重链基因poly(A)序列由SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示序列为引物，含有家蚕品种p50丝素基因的细菌人造染色体克隆为模板经PCR扩增而得。
9.根据权利要求4所述重组载体的制备方法，其特征在于，制备方法如下：将权利要求3所获得的重组载体利用限制性酶Asc Ⅰ和Fse Ⅰ插入到piggyBac衍生载体pBac[3×P3DsRedaf]载体内形成最终的注射载体。
10.权利要求1所述家蚕丝心蛋白重链表达系统或所述重组载体在丝素和丝胶表达目的蛋白中的应用。
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