[发明专利]一种与胰腺癌相关的血清/血浆tsRNA标志物、探针及其应用

说明书

本发明属于分子生物学领域，公开了一种与胰腺癌相关的血清/血浆tsRNA标志物及其应用。该标志物为tRF‑Pro‑AGG‑004和/或tRF‑Leu‑CAG‑002。本发明筛选出的tsRNA对胰腺癌病人检测的特异性和灵敏度显著高于目前临床上使用的蛋白标志物，大大提高了诊断的准确性。该标志物可用于制备诊断试剂盒，用于胰腺癌的辅助早期诊断。

发明领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一种与胰腺癌相关的血清/血浆tsRNA标志物、探针及其应用。

背景技术

胰腺癌俗称“癌中之王”，是恶性程度最高的消化道肿瘤类型之一，死亡率高居世界第三。据统计，2018年全球新发胰腺癌病例达45.9万，死亡病例达43.2万。胰腺癌预后较差，5年存活率仅5％左右,中位生存期低于6个月，严重威胁人类健康，是亟待解决的重大问题。

胰腺癌早期诊断比较困难。目前，CT、超声内镜、MRI/磁共振胰胆管造影(MRCP)是胰腺癌常用的诊断方式，但绝大部分(80-90％)病人一经诊断就处于晚期，发生了肿瘤转移等情况，失去了早期手术治疗的机会，且晚期病人对放疗和化疗不敏感。因此，筛选敏感有效的生物标志物，在早期对胰腺癌进行诊断检测，是提高胰腺癌患者治疗效果、延长患者生存期的有效途径。

非编码小RNA是近年来肿瘤分子生物学研究领域的热点，RNA高通量测序技术的发展帮助人们发现和鉴定了多种新型非编码小RNA，其中一类被命名为tRNA来源的小RNA(tRNA-derived small RNAs，tsRNAs)。tsRNA长约18-40nt,来源于tRNA成熟体或前体。近期研究发现tsRNA参与调节多种生理、病理功能，包括应激、翻译调控、神经系统疾病、病毒感染、表观遗传等等。研究发现，tsRNA与肿瘤发生发展密切相关，已经有报道发现tsRNA在肺癌、慢性淋巴细胞性白血病、乳腺癌和急性髓细胞白血病中异常表达，与肿瘤的发生发展密切相关。

近年来，大量研究发现体液中稳定存在的非编码小RNA可作为疾病诊断的分子标志物，且比传统的特异性蛋白标记方法更加有效。近期有研究发现tsRNAs在血清中也能稳定存在且含量丰富，但是，tsRNA与胰腺癌方面的相关研究目前尚未见报道，如果能筛选到胰腺癌中异常表达的血清/血浆tsRNAs作为生物标志物，并研发相应的诊断试剂盒，对胰腺癌的诊断现状将会有大大的推动。

发明内容

本发明的主要目的是针对上述问题，提出一种与胰腺癌相关的血清/血浆tsRNA标志物、以及该血清/血浆tsRNA标志物在制备胰腺癌诊断试剂盒中的应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种与胰腺癌相关的血清/血浆tsRNA标志物，所述的血清/血浆tsRNA标志物为以下序列中的中的任意一种或组合：

tRF-Pro-AGG-004：SEQ ID No.1；

tRF-Leu-CAG-002：SEQ ID No.2。

本发明提供了一种探针，所述探针能特异性捕获包括上述的与胰腺癌相关的血清/血浆tsRNA标志物。该探针是由Applied Biosystems公司定制合成的TaqMan tsRNA探针。

本发明提供了上述的血清/血浆tsRNA标志物、探针在胰腺癌诊断试剂盒制备中的应用。

本发明提供了一种胰腺癌诊断试剂盒，所述试剂盒用于检测血清/血浆中的上述的tsRNA标志物的一种或多种的表达量。

进一步的技术方案，所述的试剂盒中包括上述的探针。

进一步的技术方案，所述的试剂盒还包括PCR反应常用的试剂和酶。

进一步的技术方案，所述的试剂盒包括dNTP/AMV逆转录酶及缓冲液、MgCl2、DEPC水和Taq酶等。

本发明的有益效果：