[发明专利]一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法

权利要求书

1.一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：包括如下步骤，步骤一、载玻片培养小室的制作；步骤二、对载玻片培养小室进行灭菌；步骤三、琼脂块制备；步骤四、接种，所述接种是在超净工作台，通过无菌操作，用尖细的接种针从待观察菌种的PDA培养基上挑取小块培养基，将其接种于载玻片培养小室中琼脂块边缘上，随后用无菌镊子夹着斜立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上，用移液枪吸取2mL灭菌的20%甘油，注入接过种的载玻片培养小室滤纸片上，保湿，盖上平板盖，用封口膜封好；步骤五、培养；所述培养是将接种好的载玻片培养小室，置于培养箱19±0.5℃培养，3-5天后取出用显微镜观察并记录结果；步骤六、镜检；所述镜检是培养3-5天后，取出载玻片，置于显微镜下观察；所述观察是先在显微镜低倍镜下观察，先将需要观察的菌丝部位调到中心，调节粗准焦螺旋找到物象，再用精准焦螺旋调节直至物象清晰，然后再转动物镜，换成高倍镜观察，调节精准焦螺旋直至物象清晰；观察结束后，可以再放回去培养，直至观察完成。

2.根据权利要求1所述的一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：所述载玻片培养小室的制作是在平板培养皿底铺一张小于皿底的圆形滤纸片，在其上面放一个支撑装置，在支撑装置上放一块洁净的载玻片，然后将两块盖玻片分别斜立在载玻片的两侧，之后盖上平板盖。

3.根据权利要求2所述的一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：对所述载玻片培养小室进行灭菌是将多个制作好的载玻片培养小室置于灭菌锅中用121℃灭菌30min，烘干备用。

4.根据权利要求2或3所述的一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：所述支撑装置为U形玻棒或支撑架。

5.根据权利要求4所述的一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：所述琼脂块制备包括步骤一、用注射器吸取5~6mLPDA培养基，装入试管中；步骤二、重复步骤一，制作多支试管，然后塞上试管塞，之后用纸包扎好，放入灭菌锅中121℃灭菌20min，灭菌后冷却至60℃左右取出放置至超净工作台，逐个倒入直径为90mm的灭菌平板中；步骤三、晃动灭菌平板使培养基均匀平摊在灭菌平板上，待其凝固成薄层后用无菌解剖刀切成0.5~1cm²的琼脂块，用刀尖铲起琼脂块放在已灭菌的载玻片培养小室的载玻片上，每块载玻片上放两块琼脂块。

6.根据权利要求5所述的一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：所述接种包括如下步骤：步骤一、用75%酒精棉擦拭超净工作台的操作台面及接种用具进行消毒灭菌；步骤二、将需要观察的菌种试管种从培养箱取出，逐个使用75%酒精进行表面消毒后放入超净工作台；步骤三、将用75%酒精擦拭过的接种针放在酒精灯或燃气喷灯火焰的外焰上灼烧至接种针发红，之后冷却；步骤四、将菌种试管口放在酒精灯或燃气喷灯外焰灼烧灭菌后，旋转拔出试管塞灼烧表面，试管口向下倾斜，始终置于火焰附近；步骤五、再次将接种针置于酒精灯或燃气喷灯外焰充分灼烧，在试管培养基尖端冷却后，刮去试管壁和培养基上的气生菌丝，用接种针挑取试管近口端培养基内的菌丝，挑取厚度为0.3-0.6mm；步骤六、将接载玻片培养小室放在酒精灯或燃气喷灯外焰灼烧灭菌后打开平板盖，用灼烧后的接种针将挑取好的接种块接种于载玻片培养小室的琼脂块边缘上，随后用无菌镊子夹着斜立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上；步骤七、用移液枪吸取2mL灭菌的20%甘油，注入接过种的载玻片培养小室滤纸片上，保湿，盖上平板盖，用封口膜封好。

7.根据权利要求6所述的一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：所述PDA培养基包括以下重量份的各组分：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15-20g、蒸馏水1000mL、自然PH。