[发明专利]双辅酶依赖型草铵膦脱氢酶突变体及其在催化合成L-草铵膦中的应用

权利要求书

1.一种双辅酶依赖型草铵膦脱氢酶突变体，其特征在于，所述突变体由SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第91位、第111位、第240位和第261位进行多点突变后获得；

其中，第91位的甘氨酸突变为丙氨酸，第111位的谷氨酰胺突变为丝氨酸，第240位的天冬酰胺突变为赖氨酸，第261位的天冬氨酸突变为谷氨酰胺。

2.如权利要求1所述的双辅酶依赖型草铵膦脱氢酶突变体的编码基因。

3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示。

4.如权利要求1所述的双辅酶依赖型草铵膦脱氢酶突变体在催化合成L-草铵膦中的应用。

5.一种基因工程菌，包括宿主细胞和转入宿主细胞的目的基因，其特征在于，所述目的基因包含如权利要求2或3任一项所述的双辅酶依赖型草铵膦脱氢酶突变体的编码基因。

6.如权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，所述目的基因还包含葡萄糖脱氢酶的编码基因。

7.如权利要求5或6任一项所述的基因工程菌在催化合成L-草铵膦中的应用。

8.一种催化合成L-草铵膦的方法，其特征在于，为以下两种中的任意一种：

(1)以2-羰基-4-(羟基甲基氧膦基)-丁酸或其盐为底物，在无机氨基供体和辅酶循环系统存在的条件下，利用催化剂催化底物发生还原胺化反应，制得L-草铵膦；

(2)以D-草铵膦为底物，在无机氨基供体、D-氨基酸氧化酶和和辅酶循环系统存在的条件下，利用催化剂催化底物反应获得L-草铵膦；

在(1)和(2)中，所述辅酶循环系统为葡萄糖脱氢酶循环系统；所述催化剂为如权利要求1所述的双辅酶依赖型草铵膦脱氢酶突变体或其固定化酶，或如权利要求5或6任一项所述的基因工程菌。

9.如权利要求8所述的催化合成L-草铵膦的方法，其特征在于，所述无机氨基供体为硫酸铵。