[发明专利]基于酪氨酸酶催化的细胞膜和细胞壁荧光标记方法及应用

权利要求书

1.一种基于酪氨酸酶催化的细胞膜和细胞壁荧光标记方法，其特征在于，所述方法包括两种方案；第一种方案为使用酪氨酸酶和含苯酚基团的荧光分子，包括以下步骤：（1）取待标记生物样本，清洗2～3次，将酪氨酸酶和带有苯酚基团的荧光分子加入到样本中，37℃或室温孵育10～15分钟；（2）孵育完成后，清洗样本除去酪氨酸酶和未接枝的荧光分子；第二种方案为使用酪氨酸酶、生物素基酪酰胺和荧光染料接枝的亲和素，包括以下步骤：（1）取待标记生物样本，清洗2～3次，将酪氨酸酶和生物素基酪酰胺加入到样本中，37℃或室温孵育10～15分钟；（2）反应完成后，清洗样本，再加入荧光染料接枝的亲和素，37℃或室温下孵育5～10分钟；（3）继续清洗样本除去未结合的荧光染料接枝的亲和素；上述两种方法中所述酪氨酸酶为来源于菌菇的多酚氧化酶，所述含苯酚基团的荧光分子包括Cy3-酪酰胺、Cy5-酪酰胺、Cy7-酪酰胺、AlexaFluor 488-酪酰胺、AlexaFluor 555-酪酰胺和AlexaFluor568-酪酰胺；所述荧光染料接枝的亲和素包括异硫氰酸荧光素-亲和素和罗丹明-亲和素。

2.权利要求1所述荧光标记方法在细胞膜和细胞壁荧光成像中的应用。

3.权利要求1所述荧光标记方法在哺乳动物细胞膜的荧光成像中的应用。

4.权利要求1所述荧光标记方法在真菌细胞壁的荧光成像中的应用。

5.权利要求1所述荧光标记方法在在活体斑马鱼胚胎表皮细胞膜的荧光成像中的应用。