[发明专利]基于双DNA四面体结构检测FR的电化学生物传感器

权利要求书

1.一种生物传感器，其特征在于，其为基于双DNA四面体纳米结构的生物传感器，所述生物传感器包括探针和修饰电极；

所述探针包括带有叶酸的DNA四面体靶向探针和带有叶酸的DNA四面体信号放大探针。

2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述带有叶酸的DNA四面体靶向探针的制备方法包括：

S1：将A、S-B、S-C以及S-D四条DNA单链、TCEP以及10×PBS缓冲液混匀；

S2：在梯度PCR仪中90-100℃加热2-4min后，在20-40s内迅速降温至3-5℃并保持30s以上，得到四面体探针；

S3：将四面体探针与经EDC和NHS活化后的FA等体积混合均匀后，置于温度控制和混匀器中，37℃，300rpm反应1-3h，得到带有叶酸的DNA四面体靶向探针；

所述单链A、S-B、S-C以及S-D的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：3和SEQ ID NO：4。

3.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述置于温度控制和混匀器中，37℃，300rpm反应1-3h，的制备方法包括：

S1：将A、B-B、B-C以及B-D四条DNA单链、TCEP以及10×PBS缓冲液混匀；

S2：在梯度PCR仪中90-100℃加热2-4min后，在20-40s内迅速降温至3-5℃并保持30s以上，得到四面体探针；

S3：将四面体探针与经EDC和NHS活化后的FA等体积混合均匀后，置于温度控制和混匀器中，37℃，300rpm反应1-3h，得到带有叶酸的DNA四面体靶向探针；

所述单链A、B-B、B-C以及B-D的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：5、SEQ IDNO：6和SEQ ID NO：7。

4.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述修饰电极的制备方法包括：

a.依次用1.0μm、0.3μm和0.05μm的Al₂O₃粉末的水溶液在抛光布上打磨金电极，再用去离子水、乙醇超声处理；

b.将金电极用去离子水冲洗，然后依次在0.5M、0.1MH₂SO₄/0.01M KCL溶液中进行电化学清洗；

c.将金电极置于H₂SO₄溶液中进行活化；

d.将活化后的电极用N₂干燥，滴加带有叶酸的DNA四面体靶向探针，室温避光孵育过夜，得到S-FA修饰的工作电极。

5.根据权利要求4所述的生物传感器，其特征在于，步骤a中用去离子水、乙醇超声处理3min。

6.根据权利要求4所述的生物传感器，其特征在于，步骤c中将金电极置于0.05M的H₂SO₄溶液中进行活化。

7.利用权利要求1-6任一项所述的生物传感器进行叶酸受体检测的方法，其特征在于，包括：

(1)在修饰了带有叶酸的DNA四面体靶向探针的电极上滴加叶酸受体溶液，37℃避光孵育1-3h；

(2)滴加带有叶酸的DNA四面体信号放大探针，37℃避光孵育1-3h；

(3)取1％BSA稀释的avidin-HRP滴加到电极表面，避光常温孵育10-20min；

(4)以TMB为底液对电极进行循环伏安和时间-电流扫描，通过电流的变化来表征FR浓度的变化。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，每一步结束时用1×PBS缓冲液对电极进行冲洗，在下一步开始之前用N₂对电极进行干燥。

9.根据权利要求1-6任一项所述的生物传感器在叶酸受体检测中的应用。